1. Secuencia de reconocimiento:
* Especificidad: Cada enzima de restricción reconoce una secuencia breve específica de nucleótidos de ADN. Esta secuencia es típicamente de 4-8 pares de bases de larga y se llama secuencia de reconocimiento o Sitio de restricción .
* Naturaleza palindrómica: Muchas secuencias de reconocimiento son palindrómicas, lo que significa que leen lo mismo hacia atrás y hacia adelante en los hilos de ADN opuestos. Por ejemplo, la enzima ecori reconoce la secuencia GAATTC, que es la misma si la lee de derecha a izquierda en la cadena complementaria (CTTAAG).
2. Escisión:
* Corte: Una vez que la enzima de restricción encuentra su secuencia de reconocimiento, corta la molécula de ADN en un punto específico dentro de esa secuencia.
* extremos pegajosos vs. extremos contundentes: La forma en que un corte de enzimas de restricción puede producir "extremos pegajosos" o "extremos contundentes".
* extremos pegajosos: La enzima corta los hilos de ADN en diferentes posiciones, dejando a los voladizos cortos monocatenarios que pueden pares de bases con voladizos complementarios de otras moléculas de ADN cortadas con la misma enzima. Esto es útil para crear moléculas de ADN recombinantes.
* extremos contundentes: La enzima corta ambos hilos de ADN en la misma posición, sin dejar voladizos.
En resumen:
Los siguientes factores determinan cómo una enzima de restricción cortará el ADN:
* La secuencia de reconocimiento específica de la enzima.
* La ubicación de esa secuencia dentro de la molécula de ADN.
* El patrón de escisión específico de la enzima (extremos pegajosos frente a los extremos contundentes).
Ejemplo:
La enzima ecori corta el ADN en la secuencia GAATTC, produciendo extremos pegajosos. Esto significa que reducirá cualquier molécula de ADN que contenga esa secuencia, y los fragmentos de ADN resultantes tendrán voladizos monocatenarios que pueden usarse para la clonación u otras manipulaciones genéticas.
