Por Nitu Bansal | Actualizado el 24 de marzo de 2022

La clonación TA ofrece un enfoque sencillo y sin restricciones para la subclonación de productos de PCR. La técnica aprovecha el emparejamiento complementario de timina y adenina, lo que permite la ligadura directa sin necesidad de enzimas de restricción. La amplificación por PCR generalmente se realiza con Taq polimerasa, que agrega un único saliente de 3′-adenina a cada cadena de ADN.

Método

En la clonación TA, un vector linealizado, conocido como vector T, contiene salientes 3′-T únicos. El producto de la PCR, que lleva salientes 3′‑A, se mezcla con el vector T en una relación molar alta. Luego se agrega la ADN ligasa T4 a la mezcla, lo que permite que los pares A-T complementarios se hibriden y se sellen, lo que da como resultado un plásmido recombinante.

Ventajas y Desventajas

Ventajas:

• Protocolo rápido y sencillo:no se requieren enzimas de restricción.
• Ideal para clonar fragmentos que carecen de sitios de restricción adecuados.
• Alta eficiencia de ligadura cuando se utilizan vectores T de alta calidad.

Desventajas:

• Los kits comerciales pueden ser costosos, lo que limita su uso generalizado.
• La clonación no direccional aumenta la posibilidad de invertir la orientación de la inserción.

Kits de clonación TA

Los principales fabricantes suministran kits de clonación de TA listos para usar, incluidos Invitrogen, QIAGEN y Premier Biosoft. Estos kits proporcionan vectores T preparados previamente y reactivos de ligadura optimizados para agilizar el flujo de trabajo.