1. Enzimas de restricción:
* función: Actúe como tijeras moleculares, cortando el ADN en secuencias específicas llamados sitios de restricción.
* papel en la clonación:
* Cortar el gen de interés: Cortaron el ADN que contiene el gen deseado del organismo donante.
* Cortando el vector: Cortan el ADN del vector (por ejemplo, plásmido) en un sitio específico, creando un espacio para que se insertara el gen.
2. ADN ligasa:
* función: Actúa como pegamento molecular, uniendo dos fragmentos de ADN juntos.
* papel en la clonación:
* Insertar el gen en el vector: Después de que el gen y el vector se cortan con la misma enzima de restricción, la ADN ligasa se une a las dos piezas, creando una molécula de ADN recombinante.
3. Transcriptasa inversa:
* función: Crea una copia de ADN de una molécula de ARN (ADNc).
* papel en la clonación:
* Genes de clonación del ARN: Es esencial para la clonación de genes expresados como ARN, como los genes que producen proteínas. La transcriptasa inversa convierte el ARN en ADN, que luego se puede insertar en un vector.
4. Reacción en cadena de la polimerasa (PCR):
* función: Amplifica secuencias de ADN específicas.
* papel en la clonación:
* Creación de múltiples copias del gen: La PCR permite a los científicos generar suficientes copias del gen de interés para una clonación exitosa.
* Detección de clones: La PCR se puede usar para identificar clones que contienen el gen deseado.
5. Otras enzimas:
* ADN polimerasa: Utilizado en PCR para sintetizar nuevas hilos de ADN.
* exonucleasas: Retire los nucleótidos de los extremos de los hilos de ADN, a menudo utilizados para preparar el ADN para la clonación.
* endonucleasas: Corte el ADN en secuencias internas específicas, útil para modificar los fragmentos de ADN.
En general: Las enzimas son herramientas esenciales para la manipulación precisa del ADN en la clonación. Permiten a los científicos aislar genes específicos, insertarlos en vectores y amplificar las secuencias de ADN deseadas, lo que permite crear copias de genes y, en última instancia, expresarlos en diferentes organismos.
