Comprender los componentes:
* enzima en blanco: Esto contiene todo * excepto * el sustrato. Su propósito es tener en cuenta cualquier actividad de fondo o absorbancia que no se deba a la reacción enzimática-sustrato. Esto podría incluir:
* Auto-actividad de la enzima: Algunas enzimas pueden tener una ligera actividad incluso en ausencia de su sustrato específico.
* Reacciones no enzimáticas: La solución de tampón en sí u otros componentes en la mezcla de reacción podría contribuir a los cambios de absorbancia.
* sustrato: Esta es la molécula sobre la que actúa la enzima para producir un producto.
* Solución combinada: Esto incluiría tanto la enzima como el sustrato.
Por qué las soluciones separadas son cruciales:
1. Medición precisa de la reacción específica: El uso de espacios y sustratos separados nos permite aislar y medir la actividad solo debido a la interacción de la enzima con su sustrato específico. Podemos restar la actividad de fondo medida en el espacio en blanco a partir de la actividad total medida en la solución combinada.
2. Eliminando la interferencia: Mezclar la enzima y el sustrato de antemano podría conducir a:
* Formación de productos prematuros: La enzima podría comenzar a actuar sobre el sustrato antes de que comience el experimento, lo que lleva a resultados inexactos.
* degradación enzimática: La enzima puede volverse inestable o inactiva si se mezcla con el sustrato durante un período prolongado.
3. Control sobre el inicio de reacción: Al agregar la enzima y el sustrato por separado, obtenemos control sobre el momento preciso de la reacción comienza. Esto es esencial para estudiar la cinética de la reacción (qué tan rápido continúa).
Ejemplo:
Imagine medir la actividad de una enzima que descompone un sustrato de color. Si combina la enzima y el sustrato, el cambio de color podría comenzar de inmediato, lo que dificulta determinar la velocidad real de la reacción. El uso de un blanco para tener en cuenta cualquier color inicial y medir el cambio de color específicamente debido a la acción de la enzima en el sustrato proporcionará resultados más precisos.
En resumen:
El uso de espacios enzimáticos y sustratos por separado es crucial para mediciones de actividad enzimática precisas y confiables. Este método asegura que solo estamos midiendo la actividad específica de la enzima en su sustrato, eliminando la interferencia y permitiendo el inicio de reacción controlada.
