Los espectrofotómetros son herramientas esenciales para medir la absorbancia y transmitancia de la luz a través de una muestra, proporcionando información valiosa en campos como la química, la biología y la medicina. La calibración precisa es crucial para garantizar mediciones confiables y precisas. Aquí hay un desglose del proceso:
1. Calibración de longitud de onda:
* Usando un estándar: Este es el método más común. Se utiliza un estándar conocido con un pico de absorción específico en una longitud de onda conocida (por ejemplo, filtro de óxido de holmio, filtro Didymium).
* Procedimiento:
* El estándar se coloca en la ruta del haz del espectrofotómetro.
* La longitud de onda del instrumento se ajusta hasta que se registra la absorbancia máxima.
* El instrumento se calibra a la longitud de onda conocida del pico del estándar.
* Importancia: Asegura que el instrumento identifique con precisión las longitudes de onda de la luz que utiliza para la medición.
2. Calibración de absorbancia/transmitancia:
* usando un blanco: Un en blanco es una solución que contiene todos los componentes de la muestra, excepto el analito que se mide.
* Procedimiento:
* El blanco se coloca en la ruta del haz del espectrofotómetro.
* El instrumento está configurado para leer el 100% de transmitancia o 0 absorbancia (dependiendo del instrumento).
* Esto establece la línea de base para todas las mediciones posteriores.
* Importancia: Este paso de calibración corrige cualquier absorbancia o transmitancia causada por el disolvente u otros componentes en la muestra que no son el analito de interés.
3. Calibración específica del instrumento:
* Normas de calibración: Algunos espectrofotómetros requieren estándares de calibración específicos (por ejemplo, soluciones con concentraciones conocidas de analitos específicos).
* Procedimiento:
* Mida la absorbancia o transmitancia de los estándares utilizando el espectrofotómetro.
* Ingrese estas medidas en el software del instrumento.
* El instrumento creará una curva de calibración, que relaciona la absorbancia o la transmitancia con la concentración.
* Importancia: Permite que el instrumento convierta directamente las lecturas de absorbancia o transmitancia en mediciones de concentración para analitos específicos.
Consejos adicionales:
* Calibración regular: La calibración frecuente (diariamente o semanalmente) es esencial para mantener la precisión.
* Mantenimiento adecuado: Mantener el instrumento limpio y libre de polvo, huellas digitales y rasguños es vital para un rendimiento óptimo.
* Uso de estándares y reactivos de alta calidad: La precisión de la calibración depende de la calidad de los estándares y reactivos utilizados.
* Control de temperatura: Algunos espectrofotómetros requieren un entorno de temperatura estable para mediciones precisas.
nota: Los procedimientos y la frecuencia de calibración específicos pueden variar según el modelo del espectrofotómetro y su uso previsto. Siempre consulte el manual del instrumento para obtener instrucciones detalladas.
