1. Lisis celular:
- Reúna sus materiales que incluyen una muestra de células (tejido vegetal o animal), sal, jabón líquido para lavar platos y un tampón de extracción de ADN (tampón TE o tampón Tris-EDTA).
- Coloque un pequeño trozo de muestra de tejido en un mortero o en un recipiente pequeño con tapa.
- Añadir una pequeña cantidad de sal a la muestra (aproximadamente 1/4 de cucharadita por 1 gramo de tejido).
- Añade unas gotas de jabón líquido para lavar platos a la mezcla y tritura o tritura bien el pañuelo.
- Este paso rompe las membranas celulares y libera el ADN.
2. Precipitación de proteínas:
- Transferir el lisado (la mezcla de células rotas) a un tubo de centrífuga.
- Añadir un volumen de tampón de extracción de ADN frío igual al volumen del lisado. Mezclar bien.
- El tampón de extracción de ADN contiene detergentes que ayudan a disolver las membranas celulares y las proteínas, así como una solución salina que ayuda a precipitar las proteínas (incluidas las histonas asociadas con el ADN) de la solución.
- Las proteínas se agrupan y se separan del ADN.
3. Precipitación del ADN:
- Centrifugar la mezcla durante unos minutos a alta velocidad (entre 12.000 y 15.000 rpm).
- Esto hará que las proteínas precipitadas y los restos celulares formen un sedimento en el fondo del tubo, dejando el ADN en el sobrenadante (el líquido encima del sedimento).
4. Colección de ADN:
- Retire con cuidado el sobrenadante, que contiene el ADN, y colóquelo en un tubo nuevo.
- Evite transferir parte del sedimento, ya que contiene principalmente proteínas y restos celulares.
- El ADN se encuentra ahora en una forma relativamente pura, libre de la mayoría de los componentes y proteínas celulares.
Extracción de etanol:
1. Precipitación del ADN:
- Al tubo que contiene la solución de ADN procedente de la extracción con jabón salino, añadir un volumen igual de etanol frío al 95%-100%.
- Mezclar suavemente invirtiendo el tubo varias veces. No agite el agitador, ya que esto puede cortar el ADN.
- El ADN comenzará a precipitar de la solución como una masa blanca y fibrosa.
2. Lavado de ADN:
- Centrifugar la mezcla durante unos minutos a alta velocidad (entre 12.000 y 15.000 rpm).
- El ADN formará un sedimento en el fondo del tubo. Retire con cuidado el sobrenadante (la solución de etanol) sin alterar el sedimento.
3. Secado de ADN:
- Enjuague suavemente el sedimento de ADN con etanol frío al 70% para eliminar las sales residuales.
- Centrifugar brevemente para recoger el ADN del fondo del tubo.
- Retire con cuidado el etanol sin alterar el pellet.
- Deje que el sedimento de ADN se seque al aire durante unos minutos.
4. Resuspensión de ADN:
- Añadir una pequeña cantidad de tampón de extracción de ADN (tampón TE o tampón Tris-EDTA) al tubo que contiene el sedimento de ADN.
- Utilice una micropipeta para resuspender suavemente el ADN pipeteando hacia arriba y hacia abajo hasta que se disuelva por completo.
- El ADN ahora está listo para análisis adicionales, como PCR, electroforesis en gel u otras técnicas de biología molecular.
Ambos métodos tienen como objetivo alterar la membrana celular, liberar ADN y luego separar el ADN de otros componentes celulares mediante precipitación y centrifugación. Proporcionan una forma sencilla y rentable de extraer ADN para experimentos básicos y fines educativos.