La reacción entre tiosulfato y yodo se puede representar mediante la siguiente ecuación:
2S2O3^2- + I2 → S4O6^2- + 2I^-
Al final de la titulación, todo el tiosulfato ha reaccionado con el yodo, por lo que no habrá más iones S2O3^2- en la solución. Esto significa que cualquier yodo adicional que se agregue no reaccionará con el tiosulfato y, en cambio, permanecerá en solución como moléculas de I2. Estas moléculas de I2 absorberán la luz del espectro visible, dando a la solución un color azul.
La formación de iones triyoduro se puede representar mediante la siguiente ecuación:
I2 + I- → I3^-
Los iones I3- también son responsables del color azul de la solución.