Por Andy Pasquesi | Actualizado el 24 de marzo de 2022
CMB/Momento/GettyImages
La electroforesis en gel es una técnica fundamental en biología molecular que separa fragmentos de ADN por tamaño y los revela para su análisis. Al incrustar muestras de ADN en una matriz de gel de agarosa y aplicar un campo eléctrico, las hebras cargadas negativamente migran hacia el ánodo, y los fragmentos más cortos viajan más rápido que los más largos.
Se incorpora bromuro de etidio (EtBr) a la mezcla de agarosa (polvo de agarosa, tampón EDTA, agua). Una vez que el gel se polimeriza, EtBr se distribuye uniformemente por toda la matriz. Después de cargar muestras de ADN y tintes de seguimiento en los pocillos, el gel se somete a un voltaje controlado que atrae el ADN a través de los poros.
A medida que las hebras se mueven, EtBr se intercala entre pares de bases, uniéndose temporalmente al ADN y transportando la señal de fluorescencia. Al final del experimento, cada fragmento ha absorbido una cantidad sustancial de EtBr. Iluminar el gel con un transiluminador UV excita el tinte unido, lo que hace que las bandas de ADN brillen. Una cámara calibrada captura la imagen para su documentación.
Cuando no se dispone de un transiluminador UV, el gel se puede teñir con azul de metileno. Después de la electroforesis, remojar el gel durante la noche en una solución de azul de metileno permite que el tinte penetre en la matriz y se una al ADN mediante enlaces de hidrógeno. La coloración azul resultante es visible a simple vista, lo que proporciona una alternativa sencilla y de bajo coste a la fluorescencia.
Se añaden colorantes de seguimiento, como azul de bromofenol y xileno cianol, al tampón de carga para controlar el progreso sin interferir con la migración del ADN. El azul de bromofenol se mueve a una velocidad equivalente a ~300 nucleótidos, mientras que el xileno cianol iguala ~4000 nucleótidos. Al comparar la posición de una banda de ADN con estos marcadores, los técnicos pueden estimar el tamaño del fragmento en pares de bases.
En resumen, la electroforesis en gel junto con tinciones y colorantes de seguimiento adecuados permiten la visualización y el tamaño precisos de los fragmentos de ADN, lo que constituye la base de innumerables análisis genéticos.
