1. Lisis celular:
* Las células se abren, liberando su contenido, incluido el ADN.
* Esto se puede hacer utilizando varios métodos, como:
* Detergentes: Interrumpir las membranas celulares y libere el contenido.
* Enzimas: Desglose las proteínas, permitiendo la liberación de ADN.
* Métodos mecánicos: Como sonicarios o golpes de cuentas, interrumpir físicamente las células.
2. Eliminación de los restos celulares:
* Después de la lisis celular, el lisado contiene una mezcla de componentes celulares.
* Para aislar el ADN, se deben eliminar otros componentes como proteínas y lípidos. Esto se puede lograr a través de:
* Centrifugación: Girar el lisado a altas velocidades separa los componentes basados en la densidad. El ADN suele estar en el sobrenadante.
* Digestión: Las enzimas como la proteinasa K descomponen las proteínas.
* Salting-Out: Agregar sal al lisado, que precipita proteínas pero deja el ADN en solución.
3. Precipitación del ADN:
* El ADN se precipita fuera de solución, lo que lo hace visible. Esto generalmente se hace usando etanol o isopropanol .
* Estos alcoholes son menos polares que el agua, lo que hace que el ADN se agrupe y forme un precipitado visible.
* La adición de sal puede mejorar aún más la precipitación al neutralizar las cargas negativas en la molécula de ADN.
4. Visualización:
* El ADN precipitado se recoge luego, típicamente colocándolo alrededor de una varilla de vidrio o usando una pipeta.
* El ADN aparece como una masa blanca y fibrosa Porque está altamente enrollado y entrelazado.
Puntos importantes:
* El proceso de aislamiento y visualización de ADN se puede optimizar en función del tipo de celda y la aplicación prevista.
* Se pueden usar diferentes técnicas y reactivos según los requisitos experimentales específicos.
* La visualización también se puede mejorar utilizando técnicas de tinción, como el uso de un tinte como el bromuro de etidio, que se une al ADN y lo hace fluir bajo luz UV.
Al comprender el proceso de precipitación y visualización del ADN, puede aislar y analizar efectivamente el ADN de varias fuentes.
