1. Sitios de reconocimiento específicos:
Las enzimas de restricción tipo II reconocen y cortan el ADN en las secuencias palindrómicas - Secuencias que leen lo mismo hacia atrás y hacia adelante en hilos opuestos. Esta especificidad permite un corte preciso de ADN en ubicaciones específicas, crucial para insertar genes en vectores.
2. Patrón de escisión definido:
Por lo general, cortan el ADN en posiciones específicas Dentro de su secuencia de reconocimiento, lo que resulta en cualquiera:
* extremos contundentes: Ambos hilos se cortan directamente, dejando un final contundente.
* extremos pegajosos: La enzima corta los hilos de manera desigual, creando voladizos complementarios monocatenarios ("extremos pegajosos").
3. Previsibilidad:
Los patrones de corte predecibles permiten a los investigadores:
* Corte el ADN en las ubicaciones deseadas para aislamiento génico e inserción.
* Generar extremos compatibles para unir fragmentos de ADN de diferentes fuentes.
4. Disponibilidad:
Se han identificado y caracterizado una amplia variedad de enzimas de restricción tipo II, que ofrece una amplia gama de secuencias de reconocimiento y patrones de escisión, proporcionando flexibilidad para las estrategias de clonación de genes.
Cómo se utilizan las enzimas de restricción tipo II en la clonación de genes:
1. Aislamiento del gen: El gen objetivo se aísla del organismo donante utilizando una enzima de restricción específica que corta en un sitio dentro del gen.
2. Preparación del vector: Se corta un vector adecuado (por ejemplo, plásmido, fago) con la misma enzima de restricción, creando extremos compatibles.
3. ligadura: El fragmento de genes aislados y el vector linealizado se ligan juntos usando ADN ligasa, uniendo los fragmentos de ADN en sus extremos pegajosos.
4. Transformación: El vector recombinante se introduce en una célula huésped (por ejemplo, bacterias), donde replica y expresa el gen insertado.
En resumen: Las enzimas de restricción tipo II son indispensables para la clonación de genes debido a su:
* Especificidad: Corte preciso en secuencias de ADN específicas.
* previsibilidad: Patrones de escisión consistentes para resultados predecibles.
* Disponibilidad: Una amplia gama de enzimas para diversas aplicaciones.
Facilitan la manipulación controlada de ADN, permitiendo la inserción y expresión de genes extranjeros en nuevos huéspedes, formando la base de la biotecnología moderna.
