1. Fraccionamiento celular:
* Esta es una técnica clásica que implica homogeneización (Breaking Open) Células, seguidas de centrifugación diferencial .
* homogeneización Se puede lograr utilizando varios métodos como mezcla, sonicación o uso de una prensa francesa.
* Centrifugación diferencial separa los componentes celulares en función de su tamaño y densidad. Los orgánulos más pesados (como los núcleos) sedimentos primero a velocidades más bajas, mientras que los orgánulos más ligeros (como los ribosomas) sedimentan a velocidades más altas.
2. Centrifugación de gradiente de densidad:
* Esta técnica refina el fraccionamiento celular al colocar un gradiente de soluciones con una densidad creciente (por ejemplo, sacarosa) sobre una muestra de células homogeneizadas.
* Los orgánulos migran a la capa de densidad que coincide con su propia densidad, lo que permite una purificación adicional.
3. Citometría de flujo:
* Esta técnica utiliza haces láser para analizar y clasificar las células individuales en función de su tamaño, forma y propiedades de fluorescencia.
* Se puede usar para aislar tipos de células específicos que contienen el orgánulo deseado.
4. Inmunoprecipitación:
* Esta técnica utiliza anticuerpos para unirse específicamente a las proteínas objetivo asociadas con orgánulos específicos.
* Al agregar cuentas recubiertas con los anticuerpos, el orgánulo que contiene la proteína objetivo se puede sacar de la solución.
5. Separación magnética:
* Esta técnica utiliza perlas magnéticas recubiertas con anticuerpos contra proteínas orgánicas específicas.
* Las perlas se unen a los orgánulos objetivo, lo que les permite extraer usando un imán.
6. Cromatografía de afinidad:
* Esta técnica utiliza una columna empaquetada con un ligando específico que se une al orgánulo objetivo.
* Los orgánulos se unen al ligando, mientras que otros componentes celulares pasan a través de la columna.
7. Microfluídica:
* Esta técnica utiliza dispositivos microfluídicos para manipular y separar células y orgánulos en función de las propiedades de tamaño, forma y superficie.
La elección de la técnica depende del orgánulo específico que se está aislando y la pureza y cantidad deseadas.
