históricamente , el cloroformo se usó como parte de una extracción de cloroformo de fenol método. Así es como funcionó:
* Lisis celular: El primer paso consistió en romper las células para liberar el ADN.
* fenol: Fenol se agregó luego a la mezcla. El fenol es un fuerte desnaturalizante que separa las proteínas del ADN.
* cloroformo: Se añadió cloroformo para crear un sistema bifásico , lo que significa dos capas formadas. La capa superior contenía la solución acuosa con el ADN, mientras que la capa inferior contenía el fenol y las proteínas desnaturalizadas.
Por qué ya no se usa cloroformo:
* Seguridad: El cloroformo es un compuesto tóxico y cancerígeno, lo que representa un riesgo significativo para los investigadores.
* Eficiencia: Los métodos modernos como columnas de espín o extracción a base de cuentas magnéticas son mucho más rápidos, más fáciles y seguros que los métodos de fenol-cloroformo. Estas técnicas se basan en diferentes principios para aislar el ADN.
En lugar de cloroformo, la extracción de ADN moderna usa:
* buffers: Los tampones se usan para crear la concentración derecha de pH y sal a las células de Lyse y separar el ADN de otros componentes celulares.
* Enzimas: Las enzimas como la proteinasa K se usan para digerir proteínas, separando aún más el ADN de otros componentes celulares.
* columnas de giro o perlas magnéticas: Estos materiales se unen al ADN, lo que permite su aislamiento y purificación del resto de la muestra.
En resumen, mientras que el cloroformo se usó una vez en la extracción de ADN, ya no se considera un método seguro o eficiente. Las técnicas modernas de extracción de ADN utilizan métodos alternativos para lograr los mismos resultados con mayor seguridad y facilidad.
