1. Minimizar la actividad enzimática:
- Muchas enzimas, especialmente las proteasas, son sensibles a la temperatura y su actividad aumenta a temperaturas más altas. Mantener el tampón de lisis y la suspensión celular en frío reducen significativamente la actividad enzimática, evitando la degradación de proteínas y ácidos nucleicos. Esto es particularmente importante para aislar proteínas intactas o extraer ARN de alta calidad.
2. Preservar componentes celulares:
- Las membranas celulares están compuestas de lípidos, que se vuelven más líquidos a temperaturas más altas. Esta fluidez aumenta el riesgo de ruptura y fuga de la membrana, lo que lleva a la pérdida de componentes celulares como los orgánulos y las macromoléculas. Las condiciones de frío mantienen la integridad de la membrana y evitan la liberación no deseada.
3. Reducción de la degradación de biomoléculas:
- Las nucleasas (enzimas que degradan los ácidos nucleicos) también son sensibles a la temperatura. Las condiciones de frío ayudan a minimizar su actividad, protegiendo el ADN y el ARN de la degradación durante la lisis.
4. Ralentizar los procesos celulares:
- Los procesos metabólicos en las células continúan incluso después de la lisis. Al mantener el lisado frío, disminuye estos procesos, minimizando aún más la degradación de los componentes celulares y asegurando una representación más precisa del estado celular.
5. Facilitar la agregación de proteínas:
- En algunos casos, las temperaturas frías pueden facilitar la agregación de ciertas proteínas, lo que podría ser deseable para aplicaciones aguas abajo como la purificación o cristalización de proteínas.
Consideraciones específicas:
- La temperatura específica utilizada (por ejemplo, 0 ° C o 4 ° C) dependerá del experimento particular y la sensibilidad de las biomoléculas objetivo.
- El uso de inhibidores de la proteasa en el tampón de lisis puede minimizar aún más la degradación de las proteínas, incluso a temperaturas más cálidas.
En resumen, el uso de una condición helada durante la lisis celular es un paso crucial para mantener la integridad de los componentes celulares, evitar la degradación no deseada de las biomoléculas y garantizar una representación más precisa del estado celular.
