Generalmente, las bacterias Gram positivas retienen el tinte violeta cristal debido a la presencia de una gruesa capa de peptidoglicano en su pared celular. Esta capa es responsable de la carga positiva, lo que permite a estas bacterias retener el complejo cristal violeta-yodo formado durante el proceso de tinción. Posteriormente, las células Gram positivas aparecen de color púrpura oscuro o azul cuando se observan al microscopio.
Por otro lado, las bacterias Gram negativas poseen una capa de peptidoglicano más delgada y una membrana externa adicional. Esta diferencia en la estructura de la pared celular conduce a una pérdida del tinte violeta cristal durante el paso de lavado con alcohol del protocolo de tinción de Gram. En consecuencia, las bacterias Gram negativas no retienen el complejo cristal violeta-yodo y posteriormente absorben la contratinción, típicamente safranina. Como resultado, las células Gram negativas aparecen de color rojo o rosado cuando se observan bajo el microscopio.
Si bien el procedimiento de tinción de Gram diferencia eficazmente entre bacterias Gram positivas y Gram negativas, existen algunas excepciones en las que el procedimiento puede producir resultados inesperados. Estas excepciones incluyen:
Bacterias acidorresistentes:Algunas bacterias, como las que pertenecen al género Mycobacterium, tienen una pared celular cerosa que impide que el tinte violeta cristal penetre en las células. Como resultado, estas bacterias no se visualizan fácilmente con el procedimiento de tinción de Gram y requieren técnicas de tinción especiales, como la tinción de Ziehl-Neelsen, para poder observarlas.
Bacterias Gram variables:ciertas especies bacterianas pueden presentar variaciones en sus características de tinción de Gram dependiendo de sus condiciones de crecimiento o etapas de desarrollo. Por ejemplo, algunas bacterias pueden ser Gram positivas en determinadas etapas de su ciclo de vida y Gram negativas en otras.
Bacterias teñidas inusualmente:en raras ocasiones, algunas especies bacterianas pueden mostrar resultados inusuales en la tinción de Gram debido a composiciones únicas de la pared celular o variaciones en su composición química. Estas bacterias pueden aparecer parcialmente teñidas o intermedias en su reacción de tinción, lo que dificulta su clasificación como Gram positivas o Gram negativas.
En resumen, el procedimiento de tinción de Gram es una técnica confiable que diferencia eficazmente entre la mayoría de las bacterias Gram positivas y Gram negativas en función de las diferencias en las estructuras de sus paredes celulares. Sin embargo, existen excepciones en las que ciertas especies bacterianas pueden no ajustarse a los patrones de tinción típicos de Gram positivos o Gram negativos, lo que requiere métodos de tinción alternativos o análisis detallados para una clasificación precisa.
