Los cromosomas lineales se encuentran sólo en algunos actinomicetos. Streptomyces es una bacteria Gram positiva con un alto contenido de GC. Tiene un cromosoma lineal que varía de 6 a 10 Mb de tamaño y varios plásmidos circulares con un tamaño total del 1 al 10% del ADN cromosómico. Los estreptomicetos exhiben un ciclo de vida complejo que involucra fases de crecimiento asexual y sexual y son conocidos por su extensa producción de metabolitos secundarios bioactivos químicamente diversos.

Es necesario linealizar el cromosoma para resolver los replicones individuales en el gel del campo de pulso. CHEF separa los replicones según su tamaño. Por lo general, se ejecuta durante un largo período de tiempo, a menudo de 20 a 30 horas, para obtener una buena resolución.

Estos son los pasos para plegar un cromosoma lineal de Streptomyces:

1. Preparar el gel de agarosa. Hacer un gel de agarosa al 1% en tampón TBE 0,5X.

2. Cargue la muestra de ADN. Mezcle la muestra de ADN con tampón de carga 6X y cárguela en el gel de agarosa.

3. Ejecute el gel. Ejecutar el gel a 14°C durante 20-30 horas a 2 V/cm.

4. Visualice el ADN. Teñir el gel con bromuro de etidio y visualizar el ADN bajo luz ultravioleta.

5. Dobla el cromosoma. El cromosoma lineal de Streptomyces aparecerá como una única banda grande en el gel. Para doblar el cromosoma, corte la banda del gel y colóquela sobre un trozo de Parafilm.

6. Doble el Parafilm sobre el cromosoma varias veces hasta que quede doblado en un tamaño compacto.

7. Guarde el cromosoma. El cromosoma plegado se puede almacenar a -20°C o -80°C.

Nota: Asegúrese de usar guantes y protección para los ojos cuando trabaje con bromuro de etidio. El bromuro de etidio es un mutágeno y carcinógeno.