Las enzimas de restricción, también conocidas como endonucleasas de restricción, son tijeras moleculares que cortan el ADN en secuencias específicas llamadas sitios de reconocimiento. Este proceso es vital para muchas técnicas de biología molecular, incluida la clonación de genes, las huellas dactilares de ADN e ingeniería genética.
Así es como las diferentes enzimas de restricción producen fragmentos de ADN:
1. Reconociendo la secuencia objetivo: Cada enzima de restricción tiene un sitio de reconocimiento específico, una secuencia corta de nucleótidos de ADN (generalmente de 4 a 8 pares de bases de largo). Se unen a esta secuencia y cortan la molécula de ADN.
2. Cortando el ADN: Una vez unido al sitio de reconocimiento, la enzima de restricción escinde los enlaces fosfodiesteros dentro de la columna vertebral de ADN. Este corte puede ser:
* Bunt-DeD: La enzima se corta directamente a través de ambos hilos de ADN, dejando extremos contundentes.
* Sticky-DeD: La enzima se corta en una posición escalonada, dejando voladizos en cada hilo. Estos voladizos son complementarios entre sí y se llaman extremos pegajosos porque pueden volver a alinearse fácilmente (pegarse) a través de la unión de hidrógeno.
3. Producción de fragmentos de ADN: El corte por la enzima de restricción da como resultado dos fragmentos de ADN con extremos específicos. El tamaño y la secuencia de estos fragmentos dependen de la enzima utilizada y de la ubicación de su sitio de reconocimiento en la molécula de ADN.
Aquí hay algunos ejemplos de cómo las diferentes enzimas de restricción producen diferentes fragmentos:
* ecori: Esta enzima reconoce la secuencia GAATTC y corta entre G y A, dejando los extremos pegajosos con un voladizo de 5 '.
* hindiii: Esta enzima reconoce la secuencia AAGCTT y corta entre A y A, dejando los extremos pegajosos con un voladizo de 5 '.
* smai: Esta enzima reconoce la secuencia CCCGGG y se corta directamente a través de ambos hilos, dejando extremos contundentes.
Importancia de diferentes estilos de corte:
* extremos pegajosos: Permita fragmentos de diferentes moléculas de ADN cortadas con la misma enzima para ligarse juntos. Este proceso es esencial para la clonación del ADN.
* extremos contundentes: También se puede ligar, pero es menos eficiente que los extremos pegajosos. Esto se debe a que no hay un voladizo complementario para guiar la reacción de ligadura.
Conclusión:
Las diferentes enzimas de restricción crean fragmentos de ADN únicos al reconocer secuencias específicas y cortar la molécula de ADN de diferentes maneras. Esta propiedad permite la manipulación precisa de ADN para diversas aplicaciones en biología molecular y biotecnología.
