1. Lisis celular:
* Breaking abre las celdas: Este es el primer paso, donde se interrumpen la membrana celular y la membrana nuclear para liberar el ADN.
* Métodos mecánicos: Estos incluyen el uso de una licuadora (para muestras más grandes), sonicación (usando ondas de sonido) o moler las células (para tejidos).
* Métodos químicos: Uso de detergentes (como SDS) o enzimas (como la lisozima) para descomponer las membranas celulares.
2. Aislamiento de ADN:
* Separa el ADN de otros componentes celulares: Después de la lisis, la mezcla contiene ADN, proteínas, lípidos y otros restos celulares.
* digestión enzimática: Las enzimas como la proteinasa K se usan para descomponer las proteínas, separando aún más el ADN de otros componentes celulares.
* Precipitación de sal: Agregar soluciones saladas como el cloruro de sodio puede hacer que el ADN precipite fuera de la solución, mientras que otros componentes celulares permanecen disueltos.
* Extracción orgánica: Uso de solventes orgánicos como el cloroformo de fenol para separar el ADN de las proteínas y otros componentes celulares. El ADN permanece en la fase acuosa, mientras que los otros componentes se extraen en la fase orgánica.
3. Purificación de ADN:
* Eliminar contaminantes: Después del aislamiento, el ADN aún podría contener impurezas como ARN o proteínas.
* Precipitación de etanol: Agregar etanol a la solución hace que el ADN precipite, permitiendo una purificación adicional.
* cromatografía en columna: Utilizando columnas especializadas con resinas específicas que se unen al ADN, lo que permite la eliminación selectiva de contaminantes.
4. Almacenamiento de ADN:
* Almacenando el ADN purificado: El ADN aislado se puede almacenar en tampones a temperaturas específicas para uso a largo plazo.
Consideraciones adicionales:
* Tipo de celda: El método utilizado dependerá del tipo de célula que se está estudiando, por ejemplo, las células bacterianas son más fáciles de lizar que las células de mamíferos.
* Se necesita cantidad de ADN: La cantidad de ADN necesaria afectará el método elegido.
* Aplicaciones aguas abajo: El uso previsto del ADN (por ejemplo, secuenciación, PCR, clonación) puede requerir pasos de purificación específicos.
Ejemplo:
Un método común para extraer ADN de la sangre implica:
1. lisis: La sangre se mezcla con un tampón de lisis que contiene detergentes y enzimas para abrir las células y liberar el ADN.
2. Eliminación de proteínas: La proteinasa K se agrega para digerir proteínas y separar aún más el ADN.
3. Centrifugación: La mezcla se gira en una centrífuga para separar el ADN de otros componentes celulares.
4. Precipitación de etanol: El etanol se agrega para precipitar el ADN, que luego se recoge por centrifugación.
5. Lavado y almacenamiento: El sedimento de ADN se lava para eliminar los contaminantes restantes y se almacena en una solución de tampón.
Esta visión general simplificada resalta los pasos clave involucrados en la extracción de ADN. Hay variaciones y optimizaciones de estos métodos dependiendo de los requisitos experimentales específicos.
