1. Fijación:
* Este es el primer y más crítico paso.
* El objetivo es preservar la estructura del tejido y prevenir la descomposición.
* Los fijadores comunes incluyen formalina, glutaraldehído y alcohol.
2. Deshidratación:
* El agua se elimina del tejido utilizando una serie graduada de soluciones de alcohol (generalmente 70%, 90%, 95%y 100%).
* Esto prepara el tejido para la incrustación en cera de parafina.
3. Boreo:
* El alcohol se elimina del tejido y se reemplaza con un disolvente que es miscible con cera de alcohol y parafina (por ejemplo, xileno, tolueno o histoclear).
4. Incrustación:
* El tejido está infiltrado con cera de parafina derretida al vacío.
* Este proceso permite que la cera impregna el tejido y se solidifique, creando un bloque firme que se puede seccionar.
5. Seccionamiento:
* El bloque de parafina se recorta y se corta en secciones delgadas (típicamente de 4-10 micrómetros de espesor) usando un microtomo.
6. Montaje:
* Las secciones se montan cuidadosamente sobre portaobjetos de vidrio, generalmente con un adhesivo soluble en agua.
7. Desparafinización:
* La cera de parafina se elimina de las secciones de tejido utilizando una serie de solventes (por ejemplo, xileno, tolueno).
8. Rehidratación:
* Las secciones de tejido se rehidratan a través de una serie graduada de soluciones de alcohol (por ejemplo, 100%, 95%, 90%, 70%y agua).
9. Manchas:
* Aquí es donde se visualizan los componentes del tejido.
* Existen numerosas manchas, cada una con sus propias propiedades y aplicaciones.
* Los ejemplos incluyen hematoxilina y eosina (H&E) para la morfología general y manchas especiales para tipos o estructuras de células específicas.
10. Montaje:
* Las secciones manchadas están montadas con un cubreobjetos y un medio de montaje (por ejemplo, DPX, Permunt).
11. Etiquetado:
* Las diapositivas están etiquetadas con información relevante (nombre del paciente, fecha, tipo de tejido, mancha).
nota: Este es un protocolo estándar. Puede haber variaciones dependiendo del tipo de tejido específico, las técnicas de tinción y las aplicaciones de investigación.
