1. Aislamiento del gen de interés:
* Fuente: El gen deseado se obtiene de su organismo original (por ejemplo, bacterias, planta, animal).
* Métodos: Esto puede involucrar:
* Digestión de la enzima de restricción: Las enzimas específicas cortan el ADN en secuencias precisas.
* PCR (reacción en cadena de la polimerasa): Amplifica un fragmento de ADN específico.
2. Preparación del vector:
* Elección de vector: Se selecciona un vector adecuado (por ejemplo, plásmido, virus). El vector debe poder replicar en la celda huésped.
* Digestión de la enzima de restricción: El vector se corta con la misma enzima de restricción utilizada para el gen de interés, creando fines compatibles.
* ligadura: El gen de interés y el vector abierto se combinan usando ADN ligasa, que sella el ADN nuevamente.
3. Transformación:
* Introducción en la celda huésped: El ADN recombinante se introduce en una célula huésped (por ejemplo, bacterias, levadura).
* Métodos: Los métodos comunes incluyen:
* Transformación química: Las células se tratan con productos químicos que aumentan la permeabilidad al ADN.
* Electroporación: Un breve pulso eléctrico crea poros temporales en la membrana celular.
4. Selección de células transformadas:
* genes marcadores: El vector a menudo transporta genes marcadores (por ejemplo, resistencia a los antibióticos) que permiten la identificación de células que contienen el ADN recombinante.
* crecimiento en medios selectivos: Las células se cultivan en medios que contienen el antibiótico. Solo las células con el gen marcador sobrevivirán y se multiplicarán.
5. Producción del producto genético:
* Expresión: Las células transformadas se cultivan en grandes cantidades, y se expresa el gen de interés.
* Producción de proteínas: El ADN del gen se transcribe al ARNm, que luego se traduce en la proteína deseada.
* purificación (opcional): Si la proteína es el producto deseado, se puede purificar para eliminar otros componentes celulares.
puntos clave para recordar:
* Enzimas de restricción: Estos actúan como tijeras moleculares, cortando el ADN en secuencias específicas, dejando "extremos pegajosos" que pueden parear base con extremos compatibles en otros fragmentos de ADN.
* vectores: Estos son vehículos que llevan el gen de interés a la célula huésped. Los plásmidos son piezas circulares de ADN que se replican independientemente en las bacterias. Los vectores virales pueden integrar el gen en el genoma del huésped.
* genes marcadores: Estos genes permiten la selección de células transformadas.
* Eficiencia de transformación: El proceso de introducción de ADN extraño en células no es 100% eficiente. No todas las células tomarán con éxito el ADN recombinante.
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