El cultivo de células animales es un proceso complejo y delicado, que requiere un control cuidadoso de varios parámetros para un crecimiento óptimo. Estos pueden clasificarse ampliamente de la siguiente manera:
1. Parámetros físicos:
* Temperatura: La mayoría de las líneas celulares de mamíferos prosperan a 37 ° C. Esto es crucial para la actividad enzimática óptima y los procesos celulares.
* ph: Las células requieren un entorno ligeramente alcalino, típicamente entre 7.2 y 7.4. Esto se mantiene utilizando búferes en los medios.
* Humedad: La alta humedad (típicamente alrededor del 95%) es esencial para prevenir la evaporación y mantener el volumen de medios correcto.
* Composición de gas: Las células necesitan oxígeno para la respiración y el CO2 para mantener el pH. Esto generalmente se proporciona por las células incubadoras en una incubadora humidificada con 5% de CO2.
* Área de superficie: Las células requieren suficiente área de superficie para la unión y el crecimiento. Esto se logra a través de varios métodos como frascos, placas múltiples o microportadores.
2. Composición de medios:
* Nutrientes básicos: Los medios deben contener nutrientes esenciales como aminoácidos, vitaminas, glucosa y sales, para apoyar el crecimiento celular y el metabolismo.
* Factores de crecimiento: Algunos tipos de células requieren factores de crecimiento específicos, como la insulina o el factor de crecimiento epidérmico (EGF), para estimular la proliferación.
* suero: El suero a menudo se agrega a los medios para proporcionar nutrientes esenciales y factores de crecimiento, así como proteínas para la unión y la protección. Sin embargo, el suero es una mezcla compleja y indefinida, que puede introducir variabilidad y contaminantes potenciales.
* buffers: Se utilizan buffers como bicarbonato o HEPES para mantener la estabilidad del pH.
* Antibióticos: A veces se agregan antibióticos para prevenir la contaminación bacteriana, pero también pueden afectar el crecimiento celular y deben usarse con precaución.
* Otros aditivos: Dependiendo de la línea y la aplicación celular, se pueden requerir otros aditivos, como agentes quelantes o antioxidantes.
3. Factores específicos de la línea celular:
* Número de paso: Las células tienen una vida útil finita y sus características de crecimiento cambian con el aumento del número de paso.
* frecuencia de subcultura: La frecuencia de división de las células (subcultivas) depende de la línea celular y su tasa de crecimiento.
* Densidad de siembra: El número inicial de células sembradas en un vaso de cultivo afecta el crecimiento y la morfología celular.
* Factores de estrés: Las células pueden ser enfatizadas por factores como el hacinamiento, el agotamiento de nutrientes o las fluctuaciones de pH, lo que puede afectar negativamente el crecimiento.
4. Técnica aséptica:
* esterilidad: Mantener un ambiente estéril es crucial para prevenir la contaminación por bacterias, hongos o virus. Esto implica el uso de equipos y procedimientos estériles.
* Prevención de contaminación: El monitoreo regular de la contaminación y el uso de técnicas de esterilización apropiadas son esenciales para un cultivo celular exitoso.
5. Equipo:
* Incubadora: Una incubadora humidificada que mantiene la temperatura correcta y la composición del gas.
* Campón de cultivo celular: Una campana de flujo laminar proporciona un ambiente estéril para manejar células.
* Microscopios: Los microscopios son esenciales para visualizar la morfología celular y evaluar el crecimiento.
* pipetas y contenedores estériles: Estos son necesarios para manejar y transferir medios de cultivo celular y células.
Al controlar cuidadosamente todos estos parámetros, puede crear un entorno óptimo para el cultivo de células animales, lo que permite un crecimiento eficiente y experimentos exitosos. Sin embargo, recuerde que cada línea celular tiene requisitos y sensibilidades únicas, lo que requiere una mayor optimización y protocolos especializados para un crecimiento óptimo.
