Los ensayos de punto final y cinéticos se utilizan para medir la actividad de enzimas u otros procesos bioquímicos. Difieren en cuando Miden la formación del producto y qué información que proporcionan.
Ensayo de punto final:
* Medición: Tomado en el extremo de la reacción, después de que la reacción ha alcanzado la finalización o el equilibrio.
* Información: Proporciona un solo punto de datos que refleja la cantidad final de producto formado.
* ventajas: Simple, rápido y a menudo más barato de realizar.
* Desventajas: Menos informativos que los ensayos cinéticos. No revela información sobre la velocidad de reacción o la cinética enzimática.
ensayo cinético:
* Medición: Tomado varias veces Durante la reacción, permitiendo el monitoreo de la formación del producto con el tiempo.
* Información: Proporciona una tasa de formación de productos (por ejemplo, cambio en la absorbancia por minuto), que puede usarse para calcular:
* Velocidad inicial: La velocidad de la reacción al principio, cuando la concentración del sustrato es alta y la formación de productos es lineal.
* Parámetros cinéticos enzimáticos: KM, VMAX y KCAT, que describen la afinidad de la enzima por el sustrato y su eficiencia catalítica.
* ventajas: Más informativo, proporciona información sobre la cinética enzimática, permite un análisis más detallado del mecanismo de reacción.
* Desventajas: Más complejo, requiere equipos especializados (por ejemplo, espectrofotómetro), y puede llevar más tiempo.
Ejemplo:
* Ensayo de punto final para una hidrolasa: Mida la concentración final del producto hidrolizado (por ejemplo, usando un reactivo colorimétrico).
* ensayo cinético para una hidrolasa: Controle continuamente el cambio en la absorbancia con el tiempo a medida que el sustrato se hidroliza, lo que permite el cálculo de la velocidad inicial.
En resumen:
* Ensayos de punto final son adecuados para mediciones rápidas y simples de la concentración final del producto.
* ensayos cinéticos son más adecuados para estudiar la velocidad de la reacción y comprender la cinética enzimática.
La elección del ensayo depende de la pregunta de investigación específica y la información requerida.
