El principio del ensayo de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PD) se basa en la reacción enzimática catalizada por G6PD. G6PD es una enzima que desempeña un papel crucial en la vía de las pentosas fosfato, una vía metabólica responsable de generar NADPH, un agente reductor.
En este ensayo, G6PD cataliza la oxidación de glucosa-6-fosfato (G6P) a 6-fosfogluconato (6-PG) utilizando NADP+ como aceptor de electrones. Durante esta reacción, NADP+ se reduce a NADPH, que presenta una fuerte absorbancia a 340 nm. Al medir el aumento de la absorbancia a 340 nm a lo largo del tiempo, se puede cuantificar la actividad enzimática de G6PD.
Estos son los pasos clave involucrados en el ensayo G6PD:
1. Preparación de la muestra: Se prepara una muestra que contiene G6PD, como un lisado celular o un homogeneizado de tejido.
2. Mezcla de reacción: La mezcla de reacción normalmente incluye G6P, NADP+, una solución tampón y la muestra que contiene G6PD.
3. Incubación: La mezcla de reacción se incuba a una temperatura y un pH específicos, lo que permite que se produzca la reacción enzimática.
4. Medición espectrofotométrica: La absorbancia de la mezcla de reacción se mide a 340 nm usando un espectrofotómetro. Esta lectura de absorbancia corresponde a la cantidad de NADPH producida.
5. Cálculos: El cambio de absorbancia a 340 nm a lo largo del tiempo se utiliza para calcular la actividad enzimática de G6PD. Este cálculo considera el coeficiente de extinción del NADPH y el volumen de la mezcla de reacción.
6. Unidades de actividad enzimática: La actividad de G6PD se expresa comúnmente en unidades por litro (U/L) o unidades internacionales por litro (UI/L), donde una unidad de actividad enzimática representa la cantidad de enzima necesaria para producir 1 micromol de NADPH por minuto en las condiciones de ensayo especificadas. .
La medición de la actividad de G6PD tiene importancia clínica, ya que las deficiencias de G6PD pueden provocar una afección conocida como deficiencia de G6PD, que causa anemia hemolítica cuando se expone a ciertos medicamentos o sustancias. Los ensayos de G6PD se realizan para diagnosticar la deficiencia de G6PD y monitorear la actividad enzimática en personas con la afección.
