1. Inhibición de ADNasas :La sangre contiene varias enzimas, incluidas nucleasas, que pueden degradar el ADN si no se inhiben adecuadamente. El perclorato de sodio actúa como inhibidor de las ADNasas, particularmente aquellas que requieren magnesio o calcio para su actividad. Se une a estos iones metálicos, impidiéndoles participar en reacciones catalizadas por enzimas y protegiendo el ADN de la degradación.
2. Precipitación de proteínas :El perclorato de sodio se usa comúnmente durante el paso de precipitación de proteínas del aislamiento del ADN. Se agrega a un lisado o suspensión celular para inducir la precipitación de proteínas, incluida la hemoglobina, que abunda en los glóbulos rojos. La alta concentración de sal creada por el perclorato de sodio altera la solubilidad de las proteínas, lo que hace que se agreguen y formen un gránulo tras la centrifugación. Esto permite separar el sobrenadante que contiene el ADN de las proteínas precipitadas.
3. Precipitación de ácidos nucleicos :El perclorato de sodio también se puede emplear para precipitar ácidos nucleicos, incluido el ADN genómico, a partir del sobrenadante obtenido después de la precipitación de proteínas. Lo logra reduciendo la solubilidad de las moléculas de ADN. Cuando se añade etanol o isopropanol al sobrenadante junto con perclorato de sodio, el ADN se vuelve insoluble y forma un precipitado visible. Este precipitado puede recogerse mediante centrifugación y purificarse aún más para obtener ADN genómico puro.
4. Eliminación de contaminantes :El perclorato de sodio ayuda a eliminar contaminantes como proteínas, otras macromoléculas y sales de la preparación de ADN. La alta concentración de sal lograda con el perclorato de sodio ayuda a la precipitación eficiente de las impurezas, dejando ADN purificado.
5. Optimización del rendimiento y la calidad del ADN :El uso de perclorato de sodio en el aislamiento de ADN genómico puede optimizar tanto el rendimiento como la calidad del ADN extraído. Al inhibir eficazmente las ADNasas, previene la degradación del ADN, asegurando la integridad y el alto peso molecular del ADN aislado. Además, la eliminación eficiente de contaminantes mejora la pureza general de la preparación de ADN, lo que la hace adecuada para diversas aplicaciones de biología molecular posteriores.
En general, el perclorato de sodio desempeña un papel vital en el aislamiento del ADN genómico de la sangre humana al inhibir las ADNasas, facilitar la precipitación de proteínas y ácidos nucleicos, eliminar contaminantes y mejorar la calidad y el rendimiento del ADN aislado.
