1. Preparación de la columna de intercambio iónico:
- Una columna de intercambio iónico está empaquetada con una resina que contiene grupos cargados que pueden atraer y unirse a moléculas (iones) con carga opuesta.
- La resina puede estar cargada positivamente (resina de intercambio catiónico) o negativamente (resina de intercambio aniónico).
2. Aplicación de muestra:
- La mezcla o muestra de aminoácidos se aplica a la columna de intercambio iónico.
3. Soluciones intermedias:
- A través de la columna se pasan diferentes soluciones tampón con diferentes pH y concentraciones de sal.
4. Interacción electrostática:
- Los aminoácidos tienen diferentes cargas netas a diferentes valores de pH debido a la presencia de varios grupos funcionales cargados.
- A medida que las soluciones tampón pasan a través de la columna, los aminoácidos interactúan con los grupos cargados de la resina en función de sus cargas netas.
- Los aminoácidos cargados positivamente (cationes) se unirán a la resina cargada negativamente en la cromatografía de intercambio catiónico, mientras que los aminoácidos cargados negativamente (aniones) se unirán a la resina cargada positivamente en la cromatografía de intercambio aniónico.
5. Elución:
- Al alterar el pH o la concentración de sal de las soluciones tampón, se puede modificar la fuerza de las interacciones electrostáticas entre los aminoácidos y la resina.
- A medida que cambian las condiciones del tampón, diferentes aminoácidos eluirán (se eliminarán por lavado) de la columna en diferentes momentos.
- Este proceso de elución separa los aminoácidos en función de sus diferencias de carga.
6. Detección y recopilación:
- A medida que los aminoácidos eluyen de la columna, se detectan mediante un detector, como un detector ultravioleta-visible (UV-Vis).
- Los aminoácidos pueden entonces recogerse como fracciones separadas.
7. Fraccionamiento y Análisis:
- Las fracciones recolectadas luego se analizan y caracterizan adicionalmente utilizando técnicas como cromatografía en capa fina (TLC) o electroforesis para confirmar la identidad de los aminoácidos separados.
La cromatografía de intercambio iónico se usa ampliamente para separar y purificar aminoácidos, proteínas y otras moléculas cargadas. Proporciona un control preciso sobre la separación de compuestos en función de sus propiedades de carga específicas.
