El caldo nutriente líquido se usa para cultivar bacterias como Escherichia coli. Las recetas para este caldo varían dependiendo de la especie bacteriana y la presencia de modificaciones genéticas, por ejemplo, resistencia a antibióticos. El caldo se puede solidificar agregando agar, que permite a las bacterias formar colonias distintas, mientras que en cultivo líquido simplemente se dispersan por todo el volumen. Esta es una técnica básica pero esencial para métodos avanzados como clonación de genes o ensayos microbiológicos. Este artículo supone que las cepas estándar de laboratorio de Escherichia coli se cultivarán en placas de agar Lorg caldo (LB) (o placas de Petri).

Pese 10 gramos de triptona de grado bacteriano, 5 gramos de extracto de levadura, 5 gramos de cloruro de sodio, 15 gramos de agar o agarosa, y 1 mililitro de hidróxido de sodio 1N. Mezcle estos con un volumen de agua estéril destilada y tratada en autoclave hasta que se obtenga 1 litro de medio. En autoclave los medios en botellas o frascos con tapa suelta durante 25 minutos. Dejar enfriar a aproximadamente 50 grados Celsius antes de agregar reactivos que se destruirán a altas temperaturas, como antibióticos u otros suplementos nutricionales.

Permita que los medios tratados en autoclave se enfríen a 50 grados Celsius y no a menos de 45 grados Celsius. , ya que el agar se colocará en su contenedor antes de que pueda ser vertido. Obtenga placas de Petri estériles y vierta lo suficiente para cubrir toda el área de superficie de la placa y al menos la mitad de su profundidad. Evite llenar demasiado las placas y preferiblemente no permita que el agar entre en contacto con el borde superior del plato. Permita que las placas se solidifiquen en un entorno estéril (por ejemplo, bajo una campana de flujo laminar), dejando las tapas hacia afuera y hacia una esquina de la campana.

Seque las placas. Aunque las placas se pueden usar tan pronto como se fijen, habrá algo de humedad en la superficie del agar, lo que evitará que las colonias bacterianas se adhieran lo suficiente. Por lo tanto, es mejor secar las placas antes de aplicar cualquier bacteria, por ejemplo dejándolas a temperatura ambiente durante unos días o durante media hora bajo una campana de flujo laminar o en una incubadora de 37 grados Celsius.

Guarde los platos. Las placas secas deben apilarse al revés (invertidas) en sus tapas y volver a su embalaje original, con cinta adhesiva cerrada y envueltas en papel de aluminio para protegerlas de la luz o en un contenedor apropiado. Siempre escriba la fecha de preparación en las placas y evite usarlas si las placas tienen más de 2 meses.

Consejo

Realice todos los pasos anteriores (preferiblemente todos) como sea posible dentro de un entorno estéril (por ejemplo, bajo una llama abierta o una campana de flujo laminar) para evitar que los contaminantes bacterianos transportados por el aire entren y crezcan en los medios.