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Determinar la concentración de células en una muestra líquida es una tarea rutinaria pero esencial en los laboratorios clínicos y de investigación. Los recuentos celulares precisos informan a los médicos sobre el estado inmunológico del paciente, ayudan a diagnosticar infecciones y guían las evaluaciones de fertilidad. En la investigación, permiten a los científicos cuantificar bacterias, levaduras y otros microorganismos para estudios ecológicos o procesos industriales. El método más común y confiable para el recuento de células es el hemocitómetro, una cámara de recuento precisa que se enseña ampliamente en cursos de biología y se utiliza en laboratorios profesionales de todo el mundo.
Cuando una suspensión celular contiene millones de células, el recuento directo resulta poco práctico porque las células se superponen y no se pueden distinguir. Para lograr una dilución adecuada, transfiera 10 µl de la solución original a un tubo de ensayo estéril que contenga 90 µl de un diluyente apropiado (p. ej., solución salina tamponada con fosfato o medio de cultivo). Mezclar bien; esto crea una dilución diez veces mayor (factor de dilución =10⁻¹). Etiquete el tubo y repita el procedimiento hasta que la muestra esté lo suficientemente diluida para un recuento preciso. Cada dilución adicional de diez veces multiplica el factor de dilución por 10 (por ejemplo, una segunda dilución da 10⁻², una tercera 10⁻³).
El hemocitómetro es una cámara pequeña y transparente con una rejilla grabada en su superficie inferior. Su profundidad suele ser de 0,1 mm y la cuadrícula se divide en cuadrados grandes y pequeños cuyas áreas son de 1 mm² y 0,04 mm², respectivamente. Pipetee un pequeño volumen de la suspensión diluida en el pozo de la cámara. La acción capilar distribuye el líquido por la rejilla. Coloque la cámara en la platina de un microscopio y obsérvela con un aumento bajo (×10–×40).
Elija un patrón conveniente de cuadrados (comúnmente las cuatro esquinas y un cuadrado central) para contar al menos 100 celdas. Para celdas grandes, utilice los cuadrados más grandes; para celdas más pequeñas, cuente los cuadrados más pequeños. Registre el número de celdas en cada cuadrado seleccionado.
Cada cuadrado grande tiene un volumen de 0,1 mm³ (0,1 mm×1 mm²). Si contó 103 celdas en cinco cuadrados grandes, el volumen total contado es de 0,5 mm³. Duplicar este volumen para representar 1 mm³ completo da 206 celdas. Debido a que 1 ml equivale a 1 cm³ y contiene 1000 mm³, la concentración en la muestra diluida es:
Fórmula:Volumen del área contada×número de cuadrados =volumen total contado
Celdas ÷ volumen total contado =células por mm³
células por mm³×1000 =células por ml
Ajuste el factor de dilución utilizado durante la preparación. Para un factor de dilución de 10⁻² (es decir, 1:100), la concentración de la muestra original es:
Por lo tanto, la suspensión inicial sin diluir contenía aproximadamente 20,6 millones de células por mililitro.
