Métodos para obtener clones de una sola célula
1. Clonación de dilución (dilución limitada)
- Principio: Diluir la suspensión celular a una concentración lo suficientemente baja como para que las células individuales se separen y se colocen en pozos o puntos individuales.
- Procedimiento:
- 1. Preparación: Determine la concentración celular aproximada de su cultivo utilizando un hemocitómetro o un mostrador celular.
- 2. Dilución: Calcule el factor de dilución necesario para lograr una densidad celular deseada (por ejemplo, 1 célula por pozo). Diluta la suspensión de su celular en consecuencia.
- 3. Enchapado: Placa las células diluidas en una placa múltiple (96 pocillos, 24 pocillos, etc.) o en una placa de Petri.
- 4. Incubación: Permita que las células crezcan y formen colonias.
- 5. Selección: Identificar pozos o áreas con colonias individuales (una célula dio lugar a toda la colonia).
2. micromanipulación (selección microscópica)
- Principio: Usando un microscopio y un micromanipulador para recoger físicamente una sola celda y transferirlo a un nuevo medio de crecimiento.
- Procedimiento:
- 1. Preparación: Use un microscopio con un micromanipulador.
- 2. Selección de células: Identifique una sola célula de interés bajo el microscopio.
- 3. Aislamiento: Utilice cuidadosamente el micromanipulador para recoger la celda.
- 4. Transferencia: Transfiera la célula a un nuevo medio de crecimiento (por ejemplo, una placa de cultivo pequeño o un microtubo).
- 5. Incubación: Permita que la célula se convierta en una colonia.
3. clasificación basada en citometría de flujo
- Principio: Uso de un citómetro de flujo para clasificar las células en función de las características específicas (por ejemplo, tamaño, fluorescencia).
- Procedimiento:
- 1. Etiquetado: Si es necesario, etiquete las células con marcadores fluorescentes para diferenciarlas de otros.
- 2. Clasificación: Ejecute la suspensión celular a través del citómetro de flujo. El instrumento analiza y separa las células en función de los parámetros especificados.
- 3. Colección: Recolecte células de interés en un nuevo medio de crecimiento.
- 4. Incubación: Permita que las células crezcan en colonias.
Consideraciones para la clonación de una sola célula
* Tipo de celda: Diferentes tipos de células tienen diferentes características de crecimiento. Algunos son más sensibles al aislamiento que otros.
* Medio de crecimiento: La elección del medio de cultivo es fundamental para apoyar el crecimiento de una sola célula.
* Pureza clon: Asegúrese de que las colonias seleccionadas se originen a partir de una sola célula.
* Tiempo: La clonación puede tomar tiempo, ya que las células individuales deben multiplicarse en una colonia.
* Aplicaciones:
- Desarrollo de la línea celular: Creación de líneas celulares puras con propiedades específicas.
- Detección de drogas: Prueba de efectos de drogas en células individuales.
- Investigación genética: Estudiar la expresión génica y las mutaciones a nivel de una sola célula.
¡Avíseme si desea más detalles sobre alguno de estos métodos o tiene preguntas sobre aplicaciones específicas!
