* Los aminoácidos tienen grupos ionizables: Cada aminoácido tiene al menos dos grupos ionizables:un grupo carboxilo (-COOH) y un grupo amino (-NH2). Estos grupos pueden ganar o perder protones (H+) dependiendo del pH de la solución.
* Punto isoeléctrico (PI): Cada aminoácido tiene un valor de pH específico llamado punto isoeléctrico (PI) donde su carga neta es cero. A este pH, el aminoácido existe como un zwitterion (cargas positivas y negativas equilibradas).
* Migración en un campo eléctrico: Cuando se someten a un campo eléctrico durante la electroforesis, los aminoácidos con una carga positiva neta migrarán hacia el electrodo negativo (cátodo), mientras que aquellos con una carga negativa neta migrarán hacia el electrodo positivo (ánodo).
* Efecto de pH sobre la carga:
* pH debajo de PI: El aminoácido será protonado, con una carga positiva neta.
* pH arriba Pi: El aminoácido se desprotonará, con una carga negativa neta.
* pH en PI: El aminoácido no tendrá carga neta y no migrará.
Por lo tanto, el pH de la solución tampón utilizada en la electroforesis influye directamente en la separación de aminoácidos:
* Separación óptima: El uso de un pH ligeramente diferente del PI de los aminoácidos asegura que tengan una carga neta y migrarán a diferentes tasas, lo que lleva a una separación efectiva.
* Pobre separación: Si el pH está demasiado cerca del PI de un aminoácido, tendrá una carga neta muy baja y migrará lentamente, lo que dará como resultado una mala resolución.
* Sin separación: Si el pH está exactamente en el PI de un aminoácido, no tendrá carga neta y no migrará en absoluto.
En conclusión, el pH es un factor crítico en la electroforesis porque determina el estado de carga de los aminoácidos, influyendo en su migración en el campo eléctrico y, en última instancia, dicta la eficiencia de separación.
