1. Preparación de la muestra:
* El ADN se extrae de las células y luego se digiere con enzimas de restricción. Estas enzimas cortan el ADN en secuencias específicas, creando fragmentos de diferentes tamaños.
* Los fragmentos de ADN se mezclan con un tampón de carga que contiene un colorante (generalmente azul de bromofenol) para la visibilidad y una solución densa (como el glicerol) para ayudarlos a hundirse en el gel.
2. Preparación de gel:
* Un gel está hecho con un material poroso como agarosa o poliacrilamida. El gel actúa como un tamiz, lo que permite que los fragmentos de ADN más pequeños se muevan a través de él más fácilmente que los fragmentos más grandes.
* El gel se coloca en una cámara de electroforesis llena con una solución de tampón que realiza electricidad.
3. Electroforesis:
* Las muestras de ADN se cargan en pozos en un extremo del gel.
* Se aplica una corriente eléctrica a través del gel.
* El ADN se carga negativamente, por lo que migra hacia el electrodo positivo.
* Los fragmentos de ADN más pequeños se mueven a través del gel más rápido que los fragmentos más grandes, lo que resulta en una separación basada en el tamaño.
4. Visualización:
* Después de la electroforesis, los fragmentos de ADN se tiñen con un colorante fluorescente (como el bromuro de etidio o el verde SYBR) que se une al ADN y se puede visualizar bajo la luz UV.
* Los fragmentos de ADN aparecen como bandas en el gel, con fragmentos más pequeños que aparecen más abajo en el gel.
Otros métodos para separar segmentos de ADN de diferentes longitudes:
* cromatografía: Este método utiliza diferentes propiedades de los fragmentos de ADN para separarlos, como su afinidad por una fase estacionaria.
* electroforesis capilar: Similar a la electroforesis en gel, pero utiliza un tubo capilar estrecho en lugar de un gel. Este método ofrece una resolución más alta y una separación más rápida.
* Fraccionation de flujo de campo (FFF): Esta técnica separa las moléculas en función de su tamaño y propiedades de difusión. Utiliza un flujo laminar de un fluido portador y un campo (como un campo gravitacional o eléctrico) para separar partículas.
Aplicaciones de separación de ADN:
* Análisis genético: Identificación de mutaciones, trastornos genéticos y pruebas de paternidad.
* forense: Muestras de ADN coincidentes de escenas del crimen a sospechosos.
* Investigación: Estudiar la expresión génica, la regulación génica e interacciones proteicas.
* Biotecnología: Desarrollo de nuevos medicamentos y herramientas de diagnóstico.
La elección del método para separar segmentos de ADN depende de la aplicación específica y el rango de tamaño de los fragmentos que se están estudiando.
