Un estudio publicado en la revista PLOS ONE algún día podría ayudar a los trabajadores de la salud a determinar si las bacterias de la especie Streptococcus pneumoniae, que causan la meningitis, una inflamación de las membranas que envuelven el cerebro y la médula espinal, son resistentes a los antibióticos.

Este tipo de análisis no es tarea fácil cuando se utiliza el método convencional. La bacteria debe aislarse de una muestra de un paciente y analizarse mientras aún está viva, lo cual es difícil porque los microorganismos son sensibles y, por lo general, no sobreviven el viaje al laboratorio.

Investigadores de la sucursal Santo André del Instituto Adolfo Lutz (IAL), el laboratorio central de vigilancia epidemiológica del estado de São Paulo, desarrollaron un método novedoso altamente factible en Brasil. Entre 2014 y 2020, analizaron 873 muestras de líquido cefalorraquídeo de pacientes con sospecha de meningitis estreptocócica en clínicas de salud de seis ciudades del estado:Diadema, Mauá, Santo André, São Bernardo do Campo, São Caetano do Sul y Ribeirão Pires. El líquido cefalorraquídeo es producido por el tejido que recubre los ventrículos del cerebro. Fluye dentro y alrededor del cerebro y la médula espinal para protegerlos de lesiones y proporcionar nutrientes.

Como parte de la rutina del laboratorio, los científicos analizaron las muestras mediante PCR en tiempo real, el estándar de oro para diagnosticar enfermedades infecciosas, incluida la COVID-19. La técnica amplifica un gen específico o una secuencia de genes del microorganismo objetivo, si está presente en la muestra, para que pueda identificarse más fácilmente. En este caso, se detectó S. pneumoniae (neumococo) en 149 muestras.

Luego volvieron a analizar las muestras que dieron positivo para neumococo para detectar los tres genes asociados con la resistencia a los antibióticos, nuevamente usando PCR en tiempo real, pero esta vez con SYBR Green, un colorante que se une al ADN y emite una señal fluorescente que se captura. por el equipo.

Para averiguar qué clases de antibióticos resistieron las bacterias (penicilina, lincosamidas o macrólidos), utilizaron la técnica de la curva de disociación. “Esta técnica implica elevar la temperatura de las muestras grado a grado, haciendo que el tinte se separe del ADN a medida que las hebras gemelas en la doble hélice que forman el material genético amplificado en la máquina PCR se desenrollan gradualmente. Medimos la temperatura de fusión [Tm], que es cuando la mitad de la estructura aún está entrelazada y el resto se ha separado. Esta temperatura varía según el gen amplificado, por lo que puede usarse para identificar el gen que se ha amplificado y, por lo tanto, el antibiótico al que la bacteria es resistente", dijo Ivana Campos, investigadora principal del estudio.

Tras realizar todos estos procedimientos, los investigadores compararon los resultados con los obtenidos por el método convencional utilizado para analizar la resistencia a los antibióticos, en el que se observan bacterias vivas en contacto con cada fármaco para ver si son capaces de proliferar. This conventional test was performed on 25 samples, which were the only ones that contained viable pneumococci for the procedure. The results were similar, confirming the novel technique's potential.

"We found that 51% of the samples analyzed, which IAL received between 2014 and 2020, were sensitive to antibiotics. That's positive, meaning these patients must have had a good prognosis. On the other hand, 17% were resistant to various drugs, which is very dangerous because in these cases it's more difficult to treat the disease and other classes of antibiotic have to be tried," Campos said.

Moreover, S. pneumoniae is capable of changing its genetic makeup as it reproduces, so that new copies have the genes associated with drug resistance. "We, therefore, concluded that the test we developed can be used to study the resistance profile of pneumococcus even in the absence of the isolated strains, as evidenced for our region," she said. + Explora más

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