Mapa de contorno que muestra la recuperación total sumada de N-glicanos marcados de cetuximab en un rango de temperaturas para la desnaturalización de proteínas (60 ° C a 90 ° C) a lo largo del eje X y des-N-glicosilación (40 ° C a 60 ° C) a lo largo del eje Y. Crédito:Corey Reed
Un nuevo informe de investigación original disponible antes de imprimir en Tecnología SLAS demuestra la semiautomatización de un kit GlycoWorks RapiFluor-MS (RFMS) que utiliza un robot de pipeteo para mejorar la productividad de la investigación en ciencias de la vida. Esta plataforma robótica utiliza pipetas manuales estándar y un brazo guiado ópticamente para facilitar la automatización de los procedimientos manuales. reducir el tiempo que los investigadores pasan en la mesa de laboratorio, e imitando, lo mas cercano posible, los resultados obtenidos al utilizar el protocolo RFMS manual de GlycoWorks.
El kit GlycoWorks RapiFluor-MS (RFMS) se lanzó en 2015 y simplifica la forma en que los investigadores pueden liberar y etiquetar glucanos ligados a N. El kit permite a los analistas realizar una preparación de muestras de alto rendimiento y garantiza perfiles de N-glicanos precisos y repetibles. La etiqueta RFMS es única porque proporciona un etiquetado rápido y una sensibilidad suprema para análisis ópticos y espectrométricos de masas.
Autores Corey Reed, Jennifer Fournier y Stephan Koza de Waters Corporation (Milford MA) y Nikolas Vamvoukas de Andrew Alliance simplifican aún más este protocolo de preparación de muestras mediante la automatización utilizando una solución robótica disponible comercialmente de Andrew Alliance. Andrés, el robot de pipeteo, presenta una plataforma ideal para la automatización de este kit con su capacidad para pipetear volúmenes bajos y adaptarse a la variabilidad del volumen con dominós personalizados construidos específicamente para esta solución.
Para reproducir con precisión los resultados del protocolo manual, Los pasos sensibles a la temperatura se vuelven a optimizar para la plataforma automatizada y se prueba un rango de temperaturas para lograr la máxima eficiencia de liberación de N-glicanos. Después de pequeños ajustes, el protocolo automatizado demuestra ser estadísticamente comparable al protocolo manual en términos de recuperación de N-glicanos marcados con RFMS, así como las áreas de pico relativas de fluorescencia resultantes. Además, una subrutina en el procedimiento simplifica el proceso de normalización de la concentración de la muestra antes del protocolo RFMS, ahorrando a los usuarios una cantidad significativa de tiempo.
En el final, los autores adoptan un protocolo sólido y fácil de usar y amplían con éxito los beneficios de la investigación en ciencias de la vida aumentando la productividad del laboratorio. Los usuarios ahora pueden pasar sin problemas del protocolo manual a la solución automatizada, aliviar a los usuarios del monótono pipeteo y controlar áreas clave del protocolo que normalmente son propensas a errores de usuario.