Comprensión de los conceptos básicos
* Tris-HCl: Esta es una solución tampón elaborada combinando Tris (tris (hidroximetil) aminometano) con ácido clorhídrico (HCl).
* 10 mM: Esto equivale a 10 milimolar, lo que indica la concentración de la solución. Significa que hay 10 milimoles de Tris-HCl por litro de solución.
Materiales
* Base Tris (base libre): Necesitarás una cantidad específica de polvo base Tris.
* Ácido clorhídrico (HCl): Necesitará una solución concentrada de HCl (normalmente 1 M o 12 M).
* Agua desionizada: Utilice agua desionizada de alta calidad para mayor precisión.
* Cilindro graduado: Para medir volúmenes con precisión.
* Báscula de pesaje: Para pesar con precisión el polvo base Tris.
* medidor de pH (opcional): Para un ajuste preciso del pH.
Cálculos
1. Peso molecular de la base Tris: El peso molecular de la base Tris es 121,14 g/mol.
2. Calcule la masa de Tris base necesaria: Utilizarás la siguiente fórmula para calcular la masa de la base Tris:
* Masa (g) =(Concentración (mM) × Peso molecular (g/mol) × Volumen (L)) / 1000
* Para una solución 10 mM en 1 litro (1000 ml):
* Masa =(10 mM × 121,14 g/mol × 1 L) / 1000
* Masa =1,2114 g
Procedimiento
1. Pesa la base Tris: Pesar con cuidado la cantidad calculada de Tris base (1,2114 g por 1 litro).
2. Disolver la base Tris en agua: Agregue la base Tris a aproximadamente 800 ml de agua desionizada en un recipiente adecuado. Revuelva hasta que el polvo se disuelva por completo.
3. Ajustar el pH:
* Usando un medidor de pH: Agregue HCl concentrado gota a gota a la solución de Tris mientras monitorea constantemente el pH con un medidor de pH. Ajuste el pH al valor deseado (normalmente entre 7,5 y 8,5 para los tampones Tris-HCl).
* Sin medidor de pH: Agregue aproximadamente 0,5 ml de HCl concentrado (para una solución de 1 litro). Agite la solución y verifique el pH con papel pH. Ajuste el volumen de HCl en consecuencia hasta alcanzar el pH deseado.
4. Lleve la solución al volumen final: Después de ajustar el pH, agregue agua desionizada para llevar el volumen total de la solución a 1 litro.
5. Esterilización: Esterilice la solución si es necesario en autoclave.
Notas importantes
* Ajuste del pH: La cantidad exacta de HCl necesaria para alcanzar el pH deseado variará ligeramente dependiendo de la pureza de la base Tris y la concentración de la solución de HCl.
* Precisión: Utilice básculas y cilindros graduados precisos para garantizar una preparación precisa.
* Almacenamiento: Guarde la solución de Tris-HCl a temperatura ambiente o en el refrigerador.
* Vida útil: Las soluciones de Tris-HCl generalmente tienen una buena vida útil, pero siempre es mejor verificar si hay signos de degradación (por ejemplo, decoloración, turbidez).
Avíseme si tiene alguna pregunta o desea preparar una concentración o volumen diferente de solución de Tris-HCl. ¡Feliz de poder ayudar!
