1. ADN de plantilla:
* función: La secuencia de ADN que desea amplificar. Sirve como plan para que la enzima polimerasa copie.
2. Primeros:
* función: Secuencias de ADN cortas y monocatenales (típicamente 18-30 nucleótidos) que son complementarias a regiones específicas en el ADN de la plantilla. Se unen al ADN de la plantilla y proporcionan un punto de partida para la ADN polimerasa.
3. ADN polimerasa:
* función: Una enzima que sintetiza nuevas hilos de ADN usando el ADN de la plantilla y los cebadores. Agrega nucleótidos al extremo 3 'del cebador en una dirección de 5' a 3 '.
4. Trifosfatos de desoxinucleósidos (dntps):
* función: Bloques de construcción de ADN. Consisten en cuatro tipos:DATP, DCTP, DGTP y DTTP, que representan las cuatro bases (adenina, citosina, guanina y timina). La ADN polimerasa los usa para ensamblar las nuevas hilos de ADN.
5. Solución de búfer:
* función: Contiene sales e iones que mantienen el pH y la resistencia iónica apropiados para la actividad óptima de la ADN polimerasa.
6. Cloruro de magnesio (MGCL2):
* función: Un cofactor para la ADN polimerasa, requerido para su actividad catalítica. También ayuda a estabilizar la estructura del ADN.
7. Agua:
* función: Solvente para la reacción y proporciona un medio para que los componentes interactúen.
Aquí hay un breve resumen del proceso de PCR:
1. Denaturación: La mezcla de reacción se calienta a 94-98 ° C, lo que separa el ADN de la plantilla de doble cadena en hebras simples.
2. Recocido: La temperatura se reduce a 50-65 ° C, lo que permite que los cebadores se unan a sus secuencias complementarias en el ADN de la plantilla monocatenaria.
3. Extensión: La temperatura se eleva a 72 ° C, la temperatura óptima para la ADN polimerasa. La polimerasa extiende los cebadores, agregando DNTP para crear nuevos hilos de ADN.
Estos tres pasos se repiten para múltiples ciclos, lo que resulta en una amplificación exponencial de la secuencia de ADN objetivo.
