He aquí por qué:
* ADN de desnaturalización de soluciones alcalinas: Las altas soluciones de pH (alcalina) rompen los enlaces de hidrógeno que mantienen juntas las dos hebras de ADN, lo que lleva al ADN monocatenario. Si bien esto puede parecer útil para la hibridación, también desnudaría las sondas utilizadas en el proceso, lo que las hace ineficaces.
* La hibridación se basa en el ADN monocatenario: La hibridación ocurre entre las moléculas de ADN monocatenarias complementarias . Sin embargo, el proceso de desnaturalización debe controlarse cuidadosamente.
Así es como funciona el proceso:
1. El ADN se desnaturaliza: El ADN se calienta a alta temperatura (típicamente alrededor de 95 ° C) para romper los enlaces de hidrógeno y separar los hilos.
2. Hibridación: El ADN desnaturalizado (ADN objetivo) se enfría lentamente, lo que permite que los hilos complementarios de sondas recocieran (hibriden) a las secuencias objetivo.
3. Tratamiento alcalino (opcional): * Después de* hibridación, algunos protocolos usan una solución alcalina leve para eliminar las sondas no unidas.
Por lo tanto, el tratamiento alcalino no se usa antes de la hibridación, pero puede usarse en ciertos pasos después de la hibridación para el lavado y la eliminación de sondas no unidas.
