Comprender el proceso
* Extracción: La xantofila se extrae de un material fuente (por ejemplo, hojas de plantas) usando etanol.
* Espectrofotometría: La concentración de xantofil en la solución de etanol se determina usando un espectrofotómetro. La xantofila absorbe la luz en longitudes de onda específicas, y la cantidad de luz absorbida es proporcional a su concentración.
Métodos
Aquí hay dos métodos comunes para calcular la concentración de xantofila:
1. Usando una curva estándar
* Prepare una solución estándar: Obtenga un estándar de xantofila puro. Disolver un peso conocido del estándar en etanol para crear una solución madre de concentración conocida.
* Crear una curva estándar: Diluta la solución madre para crear una serie de soluciones con concentraciones conocidas (por ejemplo, 10, 20, 30, 40, 50 µg/ml).
* Medir absorbancia: Use un espectrofotómetro para medir la absorbancia de cada solución estándar a la longitud de onda de absorbancia máxima para xantofila (típicamente alrededor de 440-450 nm).
* Trace la curva estándar: Trace los valores de absorbancia en el eje y y las concentraciones correspondientes en el eje x. Esto creará una relación lineal entre la absorbancia y la concentración.
* Medir muestra desconocida: Ejecute su muestra de xantofila extraída a través del espectrofotómetro a la misma longitud de onda. Encuentre la concentración correspondiente en su curva estándar basada en la absorbancia medida.
2. Uso de Beer-Lambert Law
* Ley de Beer-Lambert: Esta ley establece que la absorbancia (a) es directamente proporcional a la concentración (c) del analito y la longitud de la ruta (L) del haz de luz a través de la solución. La ecuación es:a =εcl, donde ε es la absorción molar (una constante específica del analito).
* Determine la absorción molar (ε): Este valor se proporciona típicamente en la literatura o se puede determinar experimentalmente utilizando una solución estándar.
* Medir absorbancia: Mida la absorbancia de su muestra de xantofila extraída a la longitud de onda de absorbancia máxima.
* Calcule la concentración: Reorganizar la ecuación de la ley de Beer-Lambert para resolver la concentración:C =A / (εl).
Consideraciones:
* Eficiencia de extracción: Asegúrese de que el proceso de extracción sea eficiente y que toda la xantofila se haya extraído del material fuente.
* pureza de solvente: Use etanol de alta calidad para evitar la interferencia de las impurezas.
* Calibración: Siempre calibre su espectrofotómetro antes de las mediciones para garantizar resultados precisos.
* Selección de longitud de onda: Elija la longitud de onda correcta para la máxima absorbancia de xantofila (generalmente alrededor de 440-450 nm).
* Compuestos interferentes: Tenga en cuenta que otros pigmentos en su muestra pueden absorber a longitudes de onda similares. Si es necesario, use un método para separar la xantofila de estos compuestos interferentes.
Cálculo de ejemplo:
Supongamos que tiene un extracto de xantofila en etanol con una absorbancia de 0.500 a 450 nm. La absorción molar (ε) de xantofila a 450 nm es de 25,000 m⁻¹cm⁻¹ y la longitud del camino (L) de su cubeta es de 1 cm.
Usando la Ley de Beer-Lambert:
c =a / (εl)
C =0.500 / (25,000 m⁻¹cm⁻¹ × 1 cm)
C =2.0 × 10⁻⁵ m (o 20 µm)
Nota importante: Este es un ejemplo simplificado. El método y los cálculos específicos dependerán de las circunstancias específicas y del equipo que esté utilizando. Siempre consulte la literatura y los protocolos relevantes para obtener resultados precisos.
