Un grupo de investigación dirigido por el profesor Wang Fangjun del Instituto Dalian de Física Química (DICP) de la Academia de Ciencias de China ha desarrollado una estrategia de espectrometría de masas nativa resuelta en el tiempo (TR-nMS) junto con un análisis de fotodisociación ultravioleta (UVPD). Esta estrategia puede interrogar las alteraciones sutiles inducidas por mutaciones en la estabilidad de las proteínas y la dinámica de desarrollo de la estructura. El estudio se publica en el Journal of the American Chemical Society .

Los investigadores iniciaron el proceso de desarrollo de la proteína mezclando la proteína en línea con ácido fórmico. Con espectrometría de masas nativa (nMS) e ionización por electropulverización no desnaturalizante (nESI), monitorearon las especies y las intensidades relativas de los intermediarios de desarrollo de proteínas iniciados con ácido a través de distribuciones únicas de estados de carga (CSD), y caracterizaron cuantitativamente las mutaciones M42T/H114R. alteraciones de la estabilidad inducidas de las proteínas diana.

Además, los investigadores emplearon métodos de espectrometría de masas de iones de fragmentos y UVPD para comparar cuantitativamente la estructura dinámica y los detalles moleculares de los intermedios en desarrollo de la dihidrofolato reductasa de tipo salvaje (DHFR) y el mutante.

El análisis UVPD reveló el efecto de estabilización especial del cofactor nicotinamida adenina dinucleótido fosfato (NADPH) en la estructura de DHFR, y que las mutaciones M42T/H114R podrían reducir las interacciones no covalentes NADPH-DHFR, incluidos los residuos I41, Q65, V78, D79, I82. , y R98, promoviendo así una disminución de la estabilidad.

"Este trabajo proporciona una nueva técnica para estudiar la dinámica de las estructuras sutiles y los mecanismos patológicos inducidos por mutaciones", afirmó el profesor Wang.