Por Marcia Spear
Actualizado el 24 de marzo de 2022
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La tinción de Gram es una técnica microbiológica fundamental que distingue las bacterias Gram positivas de las Gram negativas en función de la estructura de su pared celular y el color resultante. El alcohol acetona desempeña un papel fundamental como agente decolorante, permitiendo que la diferenciación final del color revele la identidad bacteriana.
Después de preparar un frotis bacteriano, se aplica cristal violeta durante 30 segundos. En esta etapa, tanto las células Gram positivas como las Gram negativas aparecen uniformemente de color púrpura. Un breve lavado con agua elimina el exceso de tinte, aunque algo de violeta cristal permanece adherido a las gruesas capas de peptidoglicano de las células grampositivas.
Se agrega yodo durante un minuto, que funciona como un mordiente que se une al cristal violeta y forma un complejo insoluble de cristal violeta y yodo. Este complejo se adhiere fuertemente al peptidoglicano resistente de las bacterias Gram positivas, asegurando la tinción primaria sin un enjuague posterior con agua.
Se utiliza acetona o alcohol etílico durante 10 a 20 segundos para eliminar el complejo cristal violeta-yodo de las células gramnegativas. El alcohol disuelve la membrana lipídica externa, permitiendo que el tinte escape de la capa más delgada de peptidoglicano. Una vez que el escurrimiento es incoloro, un enjuague con agua detiene la acción decolorante. Las células Gram positivas conservan la tinción violeta, mientras que las células Gram negativas se vuelven incoloras.
Se aplica safranina durante aproximadamente un minuto para proporcionar contraste, tiñendo de rosa las bacterias Gram negativas ahora incoloras. La máscara de cristal violeta más oscura garantiza que las células Gram positivas permanezcan de color púrpura. Un enjuague final con agua elimina el exceso de safranina.
