1. Secuenciación de ADN:
* Secuenciación directa: Este es el método más común y directo. La región de interés de ADN se amplifica utilizando PCR (reacción en cadena de la polimerasa) y luego secuenciada utilizando técnicas de secuenciación automatizada. La secuencia se compara con una secuencia de referencia (generalmente una secuencia de tipo salvaje o normal). Cualquier diferencia en las secuencias indica una mutación.
* Secuenciación de próxima generación (NGS): Esta es una tecnología de secuenciación de alto rendimiento que puede secuenciar millones de fragmentos de ADN simultáneamente. NGS es particularmente útil para detectar mutaciones en grandes regiones del genoma o para identificar mutaciones en una población de células.
2. Electroforesis:
* Polimorfismo de longitud de fragmento de restricción (RFLP): Esta técnica utiliza enzimas de restricción, que cortan el ADN en secuencias específicas. Si una mutación cambia un sitio de restricción, se alterará el tamaño de los fragmentos de ADN producidos. Esto se puede visualizar mediante electroforesis en gel.
* Polimorfismo conformacional de una montaña (SSCP): Esta técnica utiliza el hecho de que las moléculas de ADN monocatenarias con mutaciones se doblan de manera diferente. Las moléculas plegadas de manera diferente migran de manera diferente a un gel, permitiendo la detección de mutaciones.
3. Ensayos moleculares:
* Hibridación de oligonucleótido (ASO) específico del alelo: Esta técnica utiliza sondas de ADN cortas que son complementarias a alelos específicos. Las sondas que coinciden con el alelo mutado hibridarse con el ADN, mientras que las sondas que coinciden con el alelo de tipo salvaje no lo hará.
* Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con cebadores específicos de mutación: Los cebadores de PCR están diseñados para amplificar específicamente el alelo mutado. Si la mutación está presente, el producto de PCR se amplificará, mientras que no se amplificará si la mutación está ausente.
4. Análisis fenotípico:
* Cambios en los rasgos observables: Algunas mutaciones dan como resultado cambios observables en el fenotipo del organismo, como los cambios en el color, el tamaño o el comportamiento. Estos cambios pueden usarse para identificar a las personas con mutaciones.
* Ensayos funcionales: Esto implica probar la actividad de una proteína o enzima que está codificada por el gen mutado. Si la proteína o la enzima no es funcional o tiene actividad alterada, esto puede usarse para identificar la mutación.
5. Técnicas de cultivo celular:
* líneas celulares inmortalizadas: Ciertas líneas celulares se pueden cultivar en el laboratorio y se pueden usar para estudiar mutaciones. Estas líneas celulares pueden usarse para investigar los efectos de las mutaciones sobre el crecimiento celular, la proliferación y otros procesos celulares.
* Tecnologías de edición de genes: Se pueden usar herramientas como CRISPR-CAS9 para introducir mutaciones específicas en líneas celulares, lo que permite el estudio de los efectos de la mutación.
6. Estudios de población:
* frecuencia de mutación: Al estudiar la frecuencia de las mutaciones en una población, los biólogos pueden identificar mutaciones asociadas con enfermedades o fenotipos específicos.
* Genética de la población: Los estudios genéticos de la población pueden rastrear la evolución de las mutaciones con el tiempo y su impacto en la aptitud general de la población.
Es importante tener en cuenta que los métodos utilizados para determinar si se ha producido una mutación variará según el contexto específico y la pregunta de investigación que se está abordando. La combinación de múltiples enfoques a menudo puede proporcionar evidencia más sólida de la presencia de una mutación.
