1. Medición del crecimiento microbiano:
* Turbidez: Los espectrofotómetros miden la turbidez (nubosidad) de un cultivo líquido. Cuantas más bacterias presentes, más luz se dispersa, lo que lleva a una lectura de mayor absorbancia. Esto permite un monitoreo rápido y no invasivo del crecimiento bacteriano.
* Curvas de crecimiento: Al tomar lecturas de absorbancia a intervalos regulares, puede rastrear el crecimiento de bacterias con el tiempo, creando una curva de crecimiento. Esto revela información importante sobre la tasa de crecimiento, la fase de retraso, la fase exponencial, la fase estacionaria y la fase de muerte.
2. Cuantificación de la concentración microbiana:
* Curvas estándar: La espectrofotometría se puede utilizar para crear curvas estándar, relacionando los valores de absorbancia con las concentraciones celulares conocidas. Esto le permite determinar la concentración de una muestra desconocida basada en su absorbancia.
* Contado de células: Si bien no es tan preciso como los métodos de conteo de células directas, la espectrofotometría proporciona una manera rápida y fácil de estimar el número de células en una muestra.
3. Análisis de actividad enzimática:
* degradación del sustrato: Algunas enzimas producen un producto de color cuando descomponen su sustrato. Al medir la absorbancia del producto, los espectrofotómetros le permiten evaluar la actividad enzimática.
* Estudios cinéticos: La espectrofotometría ayuda a comprender la cinética de las reacciones enzimáticas, medir las velocidades de reacción y determinar los parámetros enzimáticos como KM y VMAX.
4. Estudiando el metabolismo microbiano:
* Productos metabólicos: Los espectrofotómetros pueden medir la absorbancia de varios productos metabólicos, lo que indica la presencia y la actividad de vías metabólicas específicas.
* Utilización de nutrientes: Al monitorear el agotamiento de nutrientes específicos en un cultivo, la espectrofotometría ayuda a comprender cómo los microbios usan y metabolizan diferentes sustratos.
5. Detección de compuestos específicos:
* cuantificación de ADN/ARN: Los espectrofotómetros pueden medir la absorbancia de los ácidos nucleicos a longitudes de onda específicas (260 nM), proporcionando una estimación rápida de su concentración.
* Cuantificación de proteínas: Usando los métodos Bradford, Lowry o BCA, la concentración de proteínas se puede determinar en función del cambio de color de un reactivo medido por espectrofotometría.
En general, un espectrofotómetro ofrece una herramienta versátil para:
* Análisis cuantitativo: Midiendo con precisión la concentración de varios compuestos.
* Análisis cualitativo: Detectar la presencia o ausencia de compuestos específicos.
* Monitoreo y evaluación: Seguimiento de cambios en poblaciones microbianas y procesos metabólicos.
Al emplear este instrumento, los microbiólogos obtienen información sobre el crecimiento microbiano, el metabolismo, la actividad enzimática y la presencia de moléculas específicas, facilitando una variedad de aplicaciones de investigación y diagnóstico.
