Las proteínas prefabricadas son mezclas de proteínas que se han unido covalentemente a un tinte . Esto les permite ser visualizados directamente en un gel , eliminando la necesidad de procedimientos de manchas separados. Se usan comúnmente como marcadores de peso molecular En la electroforesis en gel, particularmente SDS-PAGE (Electroforesis en gel de dodecil sulfato de sodio).
Aquí hay un desglose de aspectos clave:
1. ¿Por qué usar proteínas prefabricadas?
* Conveniencia: No se requieren manchas separadas, ahorrar tiempo y esfuerzo.
* Seguimiento visual: Le permite rastrear el progreso de su separación de proteínas durante la electroforesis.
* Determinación del tamaño preciso: Proporciona puntos de referencia para determinar el peso molecular de proteínas desconocidas.
* Solución de problemas: Puede ayudar a identificar posibles problemas en su configuración de electroforesis, como la carga de gel incorrecta o la ejecución desigual.
2. Cómo funcionan las proteínas previamente manchadas:
* Conjugación de tinte: Las proteínas están vinculadas covalentemente a un tinte, generalmente un colorante fluorescente o de color.
* movilidad electroforética: El tinte no altera significativamente la movilidad electroforética de la proteína, lo que significa que migran de acuerdo con su peso molecular.
* Visualización: El tinte permite la visualización directa de las bandas de proteínas en el gel, ya sea bajo luz UV o con luz visible.
3. Características clave de las proteínas prefabricadas:
* Rango de peso molecular: Disponible en varios rangos para satisfacer diferentes necesidades experimentales.
* Propiedades de tinte: El tinte utilizado afecta la sensibilidad y la visibilidad de las bandas.
* Estabilidad: Algunas proteínas prefabricadas son más estables que otras y pueden soportar condiciones duras.
* Compatibilidad: Asegure la compatibilidad con su tampón de electroforesis y tipo de gel.
4. Aplicaciones de proteínas prefabricadas:
* Marcadores de peso molecular de SDS-PAGE: La aplicación más común.
* Western Blotting: Utilizado como referencia de tamaño para proteínas transferidas.
* Monitoreo de purificación de proteínas: Para rastrear la migración de proteínas durante los procedimientos de purificación.
* Solución de problemas de electroforesis en gel: Ayuda a diagnosticar problemas como la carga de gel desigual.
5. Tipos de marcadores de proteínas prefabricados:
* Marcadores de arcoiris: Contienen una mezcla de proteínas con diferentes colores para una fácil identificación de cada banda.
* Marcadores de un solo color: Contener un solo tinte y proporcionar menos diferenciación visual, pero puede ser útil para aplicaciones específicas.
6. Ventajas del uso de proteínas prefabricadas:
* flujo de trabajo simplificado: Elimina los pasos de manchas separados, ahorrando tiempo y esfuerzo.
* Seguimiento visual: Permite el monitoreo en tiempo real de la separación de proteínas durante la electroforesis.
* Determinación de tamaño confiable: Proporciona referencias de peso molecular precisas.
* Ayuda de solución de problemas: Ayuda a identificar posibles problemas en la configuración de la electroforesis.
7. Desventajas del uso de proteínas precipitadas:
* Costo: Puede ser más caro que los estándares de proteínas tradicionales.
* Sensibilidad: Puede no ser tan sensible como los estándares de proteínas tradicionales, especialmente para proteínas de baja abundancia.
* Interferencia de tinte: El tinte puede interferir con ciertas aplicaciones aguas abajo, como la secuenciación de proteínas o la espectrometría de masas.
En general, las proteínas prefabricadas son una herramienta conveniente y valiosa para los investigadores que trabajan con electroforesis en gel. Proporcionan una forma simple y confiable de rastrear la migración de proteínas y determinar el peso molecular. Sin embargo, es importante elegir el marcador apropiado para su aplicación específica y considerar las posibles limitaciones.
