La electroforesis en el límite libre o en movimiento es un tipo de técnica de electroforesis que se basa en el movimiento de un límite nítido Entre una solución que contiene el analito (la sustancia de interés) y la solución de tampón A . Esta técnica fue desarrollada por arne tiselius En la década de 1930 y le ganó el Premio Nobel de Química en 1948 .
Así es como funciona:
1. Preparación: Una solución que contiene el analito se coloca en capas en la parte superior de una solución de tampón en un tubo de vidrio vertical. Las dos soluciones tienen diferentes índices de refracción, creando un límite visible.
2. Electroforesis: Se aplica un campo eléctrico a través del tubo. Las moléculas de analito cargadas migran hacia el electrodo con la carga opuesta.
3. Migración: Las moléculas de analito se mueven a través de la solución del tampón, creando un límite de mudanza Eso se puede observar usando Schlieren Optics . Esta técnica utiliza la refracción de la luz para visualizar el límite y medir su movimiento.
4. Análisis: La tasa de migración del límite es proporcional a la movilidad electroforética del analito , que está determinado por su carga y tamaño. Esta información se puede utilizar para identificar y cuantificar diferentes componentes en la mezcla de analitos.
Características clave de electroforesis de límite libre o móvil:
* Sin medio de soporte: El analito migra a través de un tampón líquido, a diferencia de otras técnicas de electroforesis que usan geles o membranas.
* límite afilado: La presencia de un límite distinto permite una medición precisa de la migración del analito.
* Análisis cuantitativo: La técnica es adecuada para el análisis cuantitativo de diferentes componentes en una mezcla.
* Resolución limitada: En comparación con otras técnicas de electroforesis, la electroforesis límite en movimiento tiene una resolución limitada para separar las mezclas complejas.
Aplicaciones:
* Caracterización de proteínas: Determinar la pureza y la homogeneidad de las soluciones de proteínas.
* enfoque isoeléctrico: Identificación del punto isoeléctrico de las proteínas.
* Análisis de proteínas séricas: Estudiar la composición de proteínas séricas en aplicaciones clínicas.
Limitaciones:
* Resolución limitada: En comparación con otras técnicas, tiene una potencia de resolución más baja para mezclas complejas.
* Desafíos técnicos: Requiere equipo especializado y condiciones experimentales precisas.
* que consumen mucho tiempo: El proceso puede ser relativamente lento.
Técnicas modernas:
Si bien la electroforesis en el límite libre o en movimiento fue un avance significativo en su tiempo, ha sido reemplazado en gran medida por técnicas de electroforesis más sofisticadas y versátiles, como la electroforesis de gel y electroforesis capilar . Estas técnicas ofrecen una resolución más alta, una operación más simple y una aplicabilidad más amplia.
Sin embargo, la importancia histórica de la electroforesis límite libre o móvil permanece, ya que allanó el camino para el desarrollo de técnicas modernas de electroforesis que se usan ampliamente en varios campos hoy en día.
