Tris, o tris (hidroximetil) aminometano, es un tampón biológico común, utilizado durante todo el proceso de extracción de ADN. Durante la extracción de cualquier cantidad de fuentes, el ADN es sensible al pH. Durante la lisis celular, la eliminación de componentes celulares no deseados y la precipitación, tris se utiliza para mantener un pH estable. Además, desempeña un papel particularmente importante en la lisis celular.
TL; DR (demasiado largo; no se leyó)
La extracción de ADN es un proceso sensible al pH y se utiliza un tampón tris ayuda a mantener estable el pH sobre la lisis y la extracción celular.
Tris como un tampón
Como el pH puede influir y ser influenciado por una serie de factores celulares, mantener un pH estable es esencial para la ciencia experimental. Los amortiguadores biológicos, como los tris, son importantes porque pueden mantener un pH estable a pesar de las influencias que de otro modo podrían cambiar el pH. El tris (hidroximetil) aminometano, con un pKa de 8.1, es un tampón efectivo entre pH 7 y 9. Debido a su rango neutral, el tris es un tampón de uso común en laboratorios biológicos. Sin embargo, el tampón tris es sensible a la temperatura y debe usarse a la temperatura a la que originalmente se sometió a pH para evitar imprecisiones.
Lisis de las células
La lisis, o romper las células, es el primer paso del ADN. extracción. Esto se logra mediante un tampón que contiene tris y EDTA (ácido etilendiaminotetraacético). EDTA une cationes divalentes como el calcio y el magnesio. Dado que estos iones ayudan a mantener la integridad de la membrana celular, eliminarlos con EDTA desestabiliza la membrana. Tris es el principal componente de amortiguación; su función principal es mantener el pH del tampón en un punto estable, generalmente 8.0. Además, es probable que tris interactúe con el LPS (lipopolisacárido) en la membrana, lo que sirve para desestabilizar aún más la membrana.
Tris protege el ADN de los cambios de pH
Cuando las células se rompen, su ADN y su contenido se derraman ", 3, [[Además, a menudo se incluyen RNasa A (destruye ARN), proteasas (destruye proteínas) y SDS (dodecil sulfato de sodio, solubiliza los fragmentos de membrana). En conjunto, esta sopa de contenido celular y proteínas y ARN fragmentados puede tener un gran impacto en el pH de la solución. Debido a que el ADN es sensible al pH, es importante que Tris amortigüe la sopa y mantenga el pH en un punto estable.
Precipitación de ADN
En la etapa final de la extracción de ADN, el ADN mismo se extrae del solución. En este punto, el ADN es soluble en el tampón. Para extraer de la solución, el ADN se hace insoluble agregando etanol o isopropanol (alcohol isopropílico). Cuando esto se hace, el ADN se vuelve obvio en solución como una sustancia blanca y lisa. Aunque el ADN puede aislarse de los componentes celulares restantes de esta manera, no es "utilizable" cuando es insoluble. Después del aislamiento, se elimina el alcohol y el ADN debe devolverse a un tampón biológico, como tris, para ser utilizado.
Hágalo usted mismo
Aunque la extracción de ADN se realiza comúnmente en laboratorios de investigación, generalmente utilizando uno de una serie de kits disponibles en el mercado, cualquiera puede hacer extracción de ADN en casa usando artículos comunes para el hogar y guisantes verdes o espinacas. En este caso, tris, ni ningún tampón biológico, no está presente para proteger el ADN de los cambios de pH. Sin embargo, es una forma visual de ayudar a los estudiantes a conectarse con el ADN celular.
