Las enzimas poseen una estructura tridimensional definida. Cualquier cambio en esta estructura causa un cambio en la actividad de la enzima. El pH de la mezcla de reacción modifica esta estructura y, por lo tanto, la actividad. Cada enzima tiene un pH óptimo donde muestra actividad máxima. Las diferencias significativas de este pH causan cambios en la estructura tridimensional de la enzima que reducen su actividad. La enzima Catechol oxidasa tiene un pH óptimo de aproximadamente 7.
Acerca de Catechol Oxidase
Catechol se oxida por la catecol oxidasa en presencia de oxígeno para formar benzoquinona, que, al exponerse al aire, forma melanina . Esta enzima también se conoce con otros nombres, como tirosinasa, difenol oxidasa y polifenol oxidasa. Las papas, las manzanas y los plátanos contienen catecol oxidasa que actúa sobre el catecol incoloro y lo convierte en melanina de color marrón. El oscurecimiento que ocurre cuando se cortan y exponen estos elementos al aire es el resultado de esta reacción.
Extracción de Catechol Oxidase
La Catecol oxidasa se puede extraer de los plátanos o las papas. Mash un plátano con el doble de volumen de agua en un mortero y una mano. Alternativamente, mezcle un plátano con agua para obtener el extracto de catecol oxidasa. Filtrar a través de la muselina de mantequilla y almacenar en el refrigerador. Si usa papas, pélelas y córtelas, luego mezcle a alta velocidad con 700 ml de agua destilada fría. Filtre este jugo de patata a través de estopilla y refrigere.
Detalles experimentales
Prepare soluciones de tampón con valores de pH 2, 4, 6, 7 y 8. Etiquete cinco tubos de ensayo con estos valores de pH. Llene cada tubo a un cuarto de capacidad con el tampón respectivo. Agregue 10 gotas de extracto de catecol oxidasa en cada uno de estos tubos, seguido de 10 gotas de catecol. Agite los tubos y anote el color de cada tubo en una escala de 0 a 5, donde 0 indica que no hay color y 5 indica un color oscuro y marrón. Continúe sacudiendo los tubos y observe el color cada cinco minutos durante los próximos 20 minutos.
Interpretación de resultados
Utilice los datos que obtiene para la lectura de 20 minutos para trazar un gráfico. En el eje X, indique el pH de los buffers. En el eje Y, indique las intensidades de color que van de 0 a 5. Para cada valor de pH, marque la intensidad del color y una estas marcas para obtener el gráfico final. Ubique el pico de esta gráfica e identifique el pH óptimo para la reacción de catecol oxidasa. Siempre que haya realizado el experimento correctamente, el valor de pH óptimo será 7. A pH 7, la enzima es más activa y cataliza rápidamente la oxidación del catecol para dar un color marrón oscuro.
Precauciones
Los plátanos y las papas contienen catecol. Por lo tanto, existe la posibilidad de que algo de esto se oxide durante la reacción, lo que contribuye a la intensidad del color que observa. Para evitar esta reacción, mantenga el extracto de catecol oxidasa en un bloque de hielo antes de agregarlo a cada tubo. Catechol es venenoso, así que asegúrese de no permitir que entre en contacto con su piel. No pipetee las soluciones de catecol y si hay un derrame, use guantes para limpiarlo con toallas de papel.
