Un nuevo (y disponible gratuitamente) artículo de investigación original publicado antes de imprimir en Descubrimiento SLAS Online describe una nueva metodología que permite la investigación de un gran número de enzimas conservadas estructuralmente que pertenecen a la superfamilia de dioxigenasas dependientes de Fe (II) / 2-oxoglutarato. Esta superfamilia comprende aproximadamente 60 enzimas que se encargan de regular una gran cantidad de procesos biológicos, incluida la regulación epigenética, Reparación de ADN / ARN y detección de oxígeno. De estos, JumonjiC histona lisina desmetilasas (JMJC) y prolil hidroxilasas son posibles dianas farmacológicas debido a su relevancia para las enfermedades humanas.

El succinato es un producto común a todas las reacciones de dioxigenasa dependientes de Fe (II) / 2-oxoglutarato. Un nuevo ensayo homogéneo de Alves et al. de Promega Corporation (Madison, WI) detecta succinato usando luminiscencia. Este ensayo permite a los científicos caracterizar la actividad bioquímica de prácticamente cualquier enzima que produzca succinato, independientemente de la estructura química del sustrato. Esto demuestra la universalidad del ensayo y sus ventajas sobre los ensayos que generalmente dependen de la modificación o el etiquetado del sustrato o del reactivo necesario para capturar o monitorear el producto.

Los autores presentan una serie de aplicaciones para su método. Usando un formato miniaturizado, caracterizan la actividad enzimática de varias histonas desmetilasas JumonjiC y otras dioxigenasas, para los que actualmente no se dispone de métodos de cribado de alto rendimiento. Usando este sencillo ensayo de detección de succinato, los autores investigan las especificidades del sustrato y determinan los parámetros cinéticos aparentes para diferentes enzimas. También validan el método como herramienta de detección de inhibidores utilizando la biblioteca de compuestos LOPAC 1280 y estudian el modo de acción de determinados éxitos contra miembros de esta familia de enzimas.

La detección de succinato bioluminiscente es resistente a la interferencia química y es eficaz para caracterizar múltiples dioxigenasas dependientes de Fe (II) / 2-oxoglutarato con diversas estructuras de sustrato en un solo formato. Al investigar una gran cantidad de estas enzimas, este método podría tener un impacto significativo en el campo de la investigación de las dioxigenasas.