* Enzimas de restricción: Estas enzimas actúan como tijeras moleculares, cortando el ADN en secuencias específicas. Son cruciales para crear fines compatibles en el plásmido y el gen de interés.
* ligasa: Esta enzima actúa como pegamento molecular, uniendo los extremos cortados del plásmido y el gen, formando un plásmido recombinante.
Desglosemos el proceso:
1. Digest de restricción: El plásmido y el gen de interés se cortan con la misma enzima de restricción. Esto crea extremos pegajosos compatibles, que son voladizos cortos y monocatenarios que pueden pararse entre sí.
2. ligadura: El plásmido y el gen de corte se mezclan con enzima ligasa. La ligasa se une a los extremos pegajosos, formando un plásmido circular que contiene el nuevo gen.
Otras enzimas importantes:
* ADN polimerasa: Esta enzima se puede usar para llenar los vacíos en el ADN, particularmente si el resumen de restricción crea extremos contundentes (sin voladizos pegajosos).
* fosfatasa alcalina: Esta enzima se puede usar para evitar la auto-ligación del plásmido, lo que puede suceder si el plásmido se corta con solo una enzima de restricción.
En resumen: La combinación de enzimas de restricción y ligasa son los jugadores clave para insertar un nuevo gen en un plásmido. Se pueden usar otras enzimas dependiendo de los detalles específicos del proceso de clonación.
