1. Confirmación de la integración de inserción:
* Digestión y análisis de enzimas de restricción: Si la modificación genética implica insertar un gen específico, el ADN del organismo modificado puede digerirse con enzimas de restricción que cortan en sitios específicos dentro del gen insertado. Los fragmentos resultantes se pueden separar por electroforesis en gel. La presencia de los tamaños de fragmento esperados confirma la integración del gen.
* Amplificación y análisis de PCR: Se pueden diseñar cebadores específicos para amplificar la secuencia del gen insertado. La presencia del producto amplificado indica la integración exitosa del gen.
2. Verificación de la expresión:
* Aislamiento y análisis de ARN: El ARN extraído del organismo modificado se puede analizar mediante electroforesis en gel para detectar la presencia de ARNm correspondiente al gen insertado. Esto confirma que el gen se está transcribiendo.
* Análisis de transferencia Western: Esta técnica puede detectar la presencia del producto proteico del gen insertado.
Ejemplo:
Imagine que ha modificado genéticamente una planta para expresar un gen para la resistencia a los herbicidas.
* Paso 1: Aislaría el ADN de las plantas modificadas y no modificadas.
* Paso 2: Utilizaría enzimas de restricción para cortar el ADN, específicamente dirigido a la región donde se insertó el gen de resistencia al herbicida.
* Paso 3: Ejecutaría el ADN digerido en un aparato de electroforesis en gel.
* Paso 4: Buscaría una banda específica en el gel correspondiente al tamaño del gen insertado. Si la banda está presente en la planta modificada pero ausente en la planta no modificada, confirma la integración exitosa del gen.
Limitaciones:
* La electroforesis en gel no siempre es la técnica más sensible. Es posible que no detecte pequeños cambios en la expresión génica o pequeñas cantidades de ADN insertado.
* Puede ser difícil distinguir entre diferentes tipos de mutaciones o inserciones génicas utilizando electroforesis en gel sola.
* Si bien la electroforesis en gel puede confirmar la presencia del gen deseado, no puede confirmar su funcionalidad. Se necesitan más estudios funcionales para confirmar que el gen se está expresando y funcionando correctamente.
Otras técnicas:
La electroforesis en gel a menudo se usa junto con otras técnicas como la secuenciación, la transferencia Southern y el QPCR para proporcionar una evaluación más completa del experimento de modificación genética.
En conclusión, la electroforesis en gel es una herramienta poderosa para analizar el ADN y el ARN y puede usarse para evaluar el éxito de un experimento de modificación genética. Sin embargo, es crucial utilizar otros métodos y técnicas para confirmar los resultados y evaluar completamente el éxito del experimento.
