Una de las formas clásicas para determinar la concentración de microbios en una muestra es diluir la muestra, hacer crecer los microbios en las placas y contar las colonias. Los microbios plaqueados crecen a partir de una unidad formadora de colonias que consiste en una o más células en una colonia visible que se puede ver y contar. Las bacterias son el microbio más común para evaluar el uso de recuentos de placa. Los conteos de colonias se usan para detectar y contar microbios en el suelo, el agua y los alimentos. Los protocolos para contar colonias enfatizan un enfoque preciso y metódico.

Diluir muestras, placas e incubación

Si simplemente untras una muestra de microbio en una placa de agar, verás tantas formaciones de colonias unidades que las colonias individuales se combinarán, lo que hace que sea imposible contarlas. Para resolver este problema, mezcle la muestra en un medio líquido, tome una pequeña cantidad de esa mezcla y luego dilúyala. Repita este proceso de seis a 10 veces. Extienda la dilución final en una placa de agar e incúbela durante cuatro a siete días antes de contar las colonias.

Conteo manual

El truco principal en el recuento de colonias es contar cada punto de colonia una vez. Un enfoque es establecer la placa de Petri sobre un fondo de cuadrícula y contar las colonias en cada celda de la cuadrícula, moviéndose en un patrón metódico a través de todas las celdas. Marcar las colonias contadas en la parte posterior de la placa de Petri también puede ser un enfoque útil. En general, necesitará contar al menos tres placas; solo use placas que contienen de 30 a 300 colonias para hacer inferencias sólidas, sugiere la Microbiology Network, una firma que brinda servicios de consultoría a laboratorios y fabricantes. Las placas con colonias que son demasiado numerosas para contar o con muy pocas colonias deben volver a platearse a partir de una nueva dilución.

Conteo automatizado

El error humano se suma al tiempo involucrado en contar colonias manualmente . Para mejorar tanto la precisión como la eficiencia, coloque la placa de Petri en un dispositivo automatizado de recuento de colonias. Los contadores de colonias automatizados toman una imagen del plato, separan las colonias del fondo y luego usan un algoritmo para contar las colonias en el plato. Los algoritmos pueden tener dificultades para diferenciar colonias cuando dos o más colonias se tocan en los bordes, por lo que se trata de un área de desarrollo de software en curso.

Hacer el recuento más complicado

La precisión del cálculo de la densidad microbiana de los recuentos de colonias tiene algunas limitaciones. Las unidades formadoras de colonias pueden ser una sola célula, una cadena de células o un conjunto completo de células. La suposición es que una colonia representa una célula, por lo que las concentraciones calculadas a partir de los recuentos de colonias pueden ser bajas. Diferentes microbios necesitan diferentes condiciones de crecimiento, y las colonias en la placa solo representan los microbios que prosperan en ese medio de crecimiento en esas condiciones de incubación. Además, el recuento de colonias no registra células muertas, una consideración importante cuando se necesita la concentración de células en la muestra original.