La clonación de TA es un método simple y conveniente de subclonación de productos de reacción en cadena de la polimerasa (PCR). "TA" es la abreviatura de "timina" y "adenina". Esta técnica de clonación utiliza la capacidad de la timina para hibridarse con adenina en presencia de ligasas. Las enzimas de restricción no se usan, a diferencia del método tradicional de subclonación. En su lugar, los productos de PCR se amplifican utilizando enzimas Taq polimerasas.

Método

El método de clonación TA utiliza la actividad de transferasa terminal de cierto saliente de ácido desoxirribonucleico en cada extremo del producto de PCR.

Se utiliza un vector de clonación linealizado con sobrevirajes únicos de tres T primos (3'-T) llamados vectores T para clonar este producto de PCR en un vector plasmídico. El producto de PCR se mezcla con este vector en alta proporción.

Se agrega DNA ligasa (T4 ligasa) a la mezcla, lo que permite que los dos productos se hibriden y se unan.

Ventajas y desventajas

La clonación de TA es un método conveniente de subclonación de productos de PCR en el vector linealizado, y es mucho más simple y rápida que los métodos de subclonación tradicionales. Debido a que este método no usa enzimas de restricción, se pueden clonar productos sin sitios de enzimas de restricción.

Una desventaja es que los kits de clonación de TA son muy caros y, por lo tanto, su uso es limitado. Además, no hay clonación direccional; entonces la probabilidad de clonar en una dirección opuesta es mayor.

TA Cloning Kits

Varios fabricantes venden kits de clonación TA. Algunos son Invitrogen, QIAGEN y Premier Biosoft.