Aquí está el desglose:
1. Iluminación:
* Luz blanca es la fuente de iluminación primaria en la mayoría de los microscopios ópticos, incluidos los microscopios de fluorescencia. Ilumina la muestra que se ve.
2. Fluorescencia:
* En microscopía de fluorescencia , se utilizan tintes específicos (llamados fluoróforos) para etiquetar la muestra. Estos tintes emiten la luz de un color específico cuando se excita la luz de un color diferente.
* Luz azul a menudo se usa para excitar proteínas fluorescentes verdes (GFP) , que se usan comúnmente como marcadores genéticos.
* Luz roja a menudo se usa para excitar proteínas fluorescentes rojas (RFP) u otros tintes que emiten fluorescencia roja.
3. Filtros:
* El microscopio utiliza filtros para separar la luz de excitación de la fluorescencia emitida.
* Filtro de excitación: Este filtro solo permite que la longitud de onda específica de la luz que excita el fluoróforo pase.
* Filtro de emisión: Este filtro solo permite que la longitud de onda específica de la luz emitida por el fluoróforo llegue al observador.
Así es como funciona:
1. Excitación: La luz azul se dirige a la muestra, emocionando las moléculas GFP dentro de la muestra.
2. Emisión: Las moléculas GFP excitadas emiten luz verde.
3. Filtrado: La luz de excitación roja está bloqueada por un filtro de emisión, lo que permite que solo la fluorescencia verde alcance el ojo del observador o la cámara.
¿Por qué usar azul y rojo?
* colores distintos: La luz azul y roja se eligen por sus distintas longitudes de onda, lo que les permite excitar y detectar diferentes fluoróforos. Esto permite la visualización de múltiples objetivos dentro de una sola muestra.
* Separación espectral: La luz azul y roja está relativamente lejos en el espectro electromagnético, lo que hace que sea más fácil filtrar longitudes de onda no deseadas y aislar la fluorescencia específica.
En resumen:
* La luz azul y roja se usa en la microscopía de fluorescencia para excitar diferentes fluoróforos, pero no como la fuente de iluminación primaria.
* Los filtros son esenciales para separar la luz de excitación de la fluorescencia emitida, lo que permite la visualización de objetivos específicos dentro de una muestra.
