Un espectrofotómetro se utiliza para determinar la concentración de ciertos compuestos, como la proteína, en una solución. En general, una luz brilla a través de una cubeta llena con una muestra. Se mide la cantidad de luz que es absorbida por la muestra. Dado que los compuestos absorben luz en diferentes rangos espectrales, la longitud de onda correcta debe establecerse para el análisis. Existen numerosas formas de calcular la concentración de muestras desconocidas a través de espectrofotometría, sin embargo, el uso de patrones de referencia proporciona la mejor precisión. Además, las normas también indican si el espectrofotómetro no funciona bien u otros problemas con el análisis.

Cálculo mediante ecuaciones de línea recta

Analice los estándares de referencia al comienzo del análisis. Los estándares son concentraciones conocidas y se usan para calibrar equipos y verificar la precisión. Todas las muestras deben estar dentro del rango de trabajo de los estándares. De lo contrario, las muestras deberán diluirse o la concentración de estándares aumentará.

Haga un diagrama de dispersión o un gráfico de líneas con las lecturas de concentración y absorción estándar. La concentración estará en el eje y, la absorbencia en el eje x. Por ejemplo, los estándares son 1 ppm, 2.5 ppm y 5 ppm. La absorbencia dada fue 1 ppm = .25, 2.5 ppm = .5 y 5 ppm = .75.

Formatea la línea de tendencia para mostrar una ecuación en el gráfico. La ecuación mostrará la fórmula y = mx + b. Por ejemplo, usando los estándares en el paso 2, la ecuación es y = .1224x + 0.1531. La mayoría de las líneas de tendencia son interceptadas en cero, pero depende del método analítico y del valor de R cuadrado.

Analiza muestras desconocidas y registra lecturas de absorbencia.

Usa la ecuación (y = mx + b ) para determinar la concentración de muestras.

Comprender la ecuación de línea recta

Deje que "Y" iguale la concentración. Esto es lo que se resolverá.

Deje que "X" sea igual a la absorbencia de la muestra. Esta es la absorbencia medida por el espectrofotómetro.

Permita que "" iguale la pendiente y que "b" iguale la intersección con el eje y. Ambos se dan, sin embargo, si la línea de tendencia se forzó a través de 0, entonces "b" será 0.

Resuelva para la concentración. Usando el ejemplo en el paso 3, sustituya "x" como una absorbencia dada de .563. Por lo tanto:

y = .1224 (.563) + 0.1531

y (concentración) = .222011

Consejo

Las unidades de la concentración ser el mismo que los estándares. Por ejemplo, las unidades son partes por millón (ppm) o partes por billón (ppb).

Los estándares de referencia y las muestras se contaminan fácilmente.

Advertencia

Lea siempre todas las partes de ensayo o método antes del revelado.